医学课件DNA重组技术与基因操作-(2).pptVIP

第三章动物基因工程基础;基因工程研究的理论依据;DNA重组技术要有四个必要条件：;

DNA限制性内切酶可分为三类：

Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ

Ⅰ、Ⅲ酶在基因工程中基本不用,why?;Ⅰ、Ⅲ限制性内切酶在同一蛋白分子中兼有甲基化作用及依赖于ATP的限制性内切酶活性。

Ⅰ类酶结合于特定的识别位点，但却没有特定的切割位点，酶对其识别位点进行随机切割，很难形成稳定的、特异性切割末端。

Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA，然后从底物上解离下来。

;核酸内切限制酶的类型及其主要特性;一、II类限制性内切酶的特点;EcoRI特异识别GAATTC及其互补碱基组成的双链片段

;二、使用限制性内切酶时应注意的问题;2、注意酶反应条件，相同反应条件的酶可以同时酶解DNA样品。

3、注意说明书中所列出的comments的内容，会提供有关限制性内切酶识别序列中位点特异性甲基化的信息以及引起酶产生staractivity的原因。;4、注意酶的浓度，酶切时不是酶加得越多越好。

一般以在20μl反应体积中，37℃，每小时水解1微克DNA的酶量定为一个酶单位。

5、注意酶在保温过程中的活性变化。

ACCⅠ在5小时内具有全部活力

BamHⅠ在第一个小时内具有全部活力，在第二小时具有部分活力，而在2小时以后就无活力了。

CfoⅠ仅在第一个小时内具有全部活力，一个小时以后就没有活力了。;三、连接酶

定义：用