纸层析法分析氨基酸专家讲座.pptxVIP

试验二、纸层析法分析氨基酸;纸上层析法是分配层析法中一个，常以滤纸为惰性支持物。纸上层析法是分离、判定和定量测定氨基酸、糖类、抗生素等有机物质一项主要而简便分析方法。所用设备简单、操作方便，使用样品少，分离效果好，为近代生物化学分析中主要技术之一。此法广泛地应用于科研和生产分析工作中。;常以水和有机溶剂作为展层剂；水和有机溶剂互溶后形成两个相：一个是饱和了有机溶剂后水相,一个是饱和了水后有机溶剂相。因为滤纸纤维素上羟基和水分子有较大亲和力,其吸附水相为固定相,有机溶剂相为移动相。

因为物质极性大小不一样,在两相中分配百分比有所差异。极性小物质在有机相中分配较多,随有机相移动较快；而极性大物质在水相中分配较多,移动相对较慢,从而将极性不一样物质分开;在相同条件下，每种物质都有其固定Rf值。

Rf值定义为：

原点到层析斑点中心距离

Rf=

原点到溶剂前沿距离

;影响Rf值原因有：

①物质本身化学结构；

②展层所用溶剂系统；

③展层剂pH值；

④展层时温度；

⑤展层所用滤纸；

⑥展层方向(横向，上行或下行)。

用纸层析判定样品时，普通都与标准品相比较。若没有标准品，可选择文件记载该物质层析条件，依