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细胞培养实验操作指导书

###一、实验概述

细胞培养是生物医学研究中常用的技术手段，广泛应用于药物筛选、疾病模型构建及基础生物学研究。本操作指导书旨在提供标准化的细胞培养实验流程，确保实验结果的准确性和可重复性。

###二、实验准备

####（一）实验材料

1.细胞系：根据实验需求选择合适的细胞系（如HeLa、293T等）。

2.培养基：常用培养基包括DMEM、F12等，需根据细胞类型添加10%胎牛血清（FBS）和1%双抗（青霉素-链霉素）。

3.培养瓶/皿：选择无菌塑料材质，如T75或6孔板。

4.其他：PBS缓冲液、胰蛋白酶、细胞计数板、CO?培养箱等。

####（二）实验环境

1.环境要求：超净工作台或生物安全柜，确保无菌操作。

2.温度与湿度：培养箱温度设为37°C，CO?浓度维持在5%。

###三、实验步骤

####（一）细胞复苏

1.取冻存细胞，迅速置于37°C水浴中解冻。

2.加入预温培养基（含10%FBS）混匀，转移至培养皿中。

3.放入培养箱，观察细胞贴壁情况。

####（二）细胞传代

1.**准备阶段**：吸弃旧培养基，加入PBS清洗1-2次，避免残留血清影响消化效果。

2.**消化处理**：滴加胰蛋白酶（如0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液）2-5mL，37°C孵育3-5分钟（根据细胞密度调整时间）。

3.**终止消化**