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先导编辑基本原理及特点

一、先导编辑的核心分子机制

先导编辑（PrimeEditing）是2019年由哈佛大学DavidLiu团队开发的新型精准基因编辑技术，其核心原理是将逆转录酶与CRISPR-Cas系统融合，通过“搜索-逆转录-整合”三步实现对基因组的精准修改。与传统CRISPR-Cas9技术依赖双链DNA断裂（DSB）和非同源末端连接（NHEJ）或同源定向修复（HDR）不同，先导编辑通过引导编辑向导RNA（pegRNA）同时实现靶位点识别和编辑模板递送，大幅降低了脱靶效应和编辑副产物。

（一）pegRNA的结构与功能

引导编辑向导RNA（PrimeEditingGuideRNA,pegRNA）是先导编辑系统的核心组件，它在传统sgRNA的基础上延伸出一段包含编辑信息的逆转录模板（RTtemplate）和引物结合位点（PBS）。具体来说，pegRNA的5端保留了与Cas9结合的scaffold序列，中间是与靶DNA互补的spacer序列，3端则依次连接PBS和RTtemplate。其中，PBS序列与靶DNA链在Cas9切割位点附近的序列互补，可作为逆转录的起始位点；RTtemplate则携带了预期的编辑信息，包括碱基替换、插入或缺失的具体序列。

当pegRNA与Cas9（通常是H840A突变的nickaseCas9，nCas9）形成复合物后，spacer序列