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细胞测定操作规定

一、概述

细胞测定是生物学和医学研究中的基础技术，广泛应用于细胞计数、细胞活力分析、细胞增殖研究等领域。为确保实验结果的准确性和可重复性，必须严格遵循标准化的操作规程。本规程旨在规范细胞测定操作流程，包括样品准备、仪器校准、实验操作及数据记录等环节。

二、样品准备

（一）细胞悬液制备

1.使用无菌操作台进行细胞培养和处理。

2.细胞消化：用0.25%胰蛋白酶或EDTA溶液消化贴壁细胞，37℃孵育3-5分钟，期间轻柔吹打悬浮细胞。

3.稀释细胞：用细胞计数液（如0.4%台盼蓝溶液）或培养基将细胞浓度调整至适宜范围（通常为1×10^4-1×10^6/mL）。

（二）样品处理

1.混匀细胞悬液：使用移液器或涡旋振荡器充分混匀样品，避免细胞聚集。

2.离心（如需）：对于混浊样品，可4000rpm离心5分钟，弃上清后重悬细胞。

三、仪器校准与设置

（一）细胞计数仪校准

1.使用标准细胞计数盘（如血细胞计数盘）校准计数仪，确保计数精度。

2.检查光源亮度与聚焦，确保视野清晰。

（二）实验参数设置

1.选择合适的计数模式：如手动计数、自动阈值设置等。

2.设定细胞浓度单位：根据实验需求选择/mL或/μL。

四、实验操作步骤

（一）手动细胞计数

1.加样：取10μL细胞悬液加入计数盘，盖上盖玻片。

2.计数：在显微镜下按标准分区（如血细胞计数盘的大方格）计