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大肠杆菌表达人鼻病毒3c蛋白酶和活性研究

摘要：人鼻病毒3C蛋白酶具有对底物的识别具有高特异性的性质，且在4℃下也具有极高的酶活性，目前人鼻病毒3C蛋白酶常用于实验室中，作为一种商品化酶。研究在大肠杆菌中表达人鼻病毒3C蛋白酶有利于其作为商品酶的生产。本实验利用实验室已有的人鼻病毒3c蛋白酶GST-r3p进行实验。设计3C蛋白酶底物DNA序列的PCR引物，以获得酶的底物DNA序列，并将其整合到GST载体上，然后导入GST载体中得到GST-r3p’-EMGFP，将酶与底物分别转化进入大肠杆菌BL21，对BL21进行诱导表达以获得目标蛋白。细胞破碎后获得表达蛋白，将底物与酶的细胞破碎液按1: