重组体克隆的筛选和鉴定课件.pptVIP

2.過程硝酸纖維素濾膜載體和插入的cDNA總mRNAcDNA基因的mRNA雜交洗脫cDNA基因的mRNA體外翻譯cDNA編碼的蛋白電泳凝膠放射自顯影cDNA編碼的蛋白硝酸纖維素濾膜載體和插入的cDNA硝酸纖維素濾膜載體和插入的cDNA收集35S標記的氨基酸專門設計檢測能同DNA特異結合的蛋白質因數。待測蛋白質硝酸纖維素濾膜能與蛋白質結合的DNA序列放射性標記待測蛋白質硝酸纖維素濾膜能與蛋白質結合的DNA序列放射性標記五、DNA-蛋白質相互作用篩選法3.Broome-Gilbert雙位點檢測法質粒基因A插入基因B表達質粒蛋白A外源蛋白B融合蛋白檢測融合蛋白。既檢測外源基因產物又檢測載體基因產物。固相支持濾膜抗A抗體125I標記的抗B抗體質粒蛋白A外源蛋白B質粒蛋白A外源蛋白B固相支持濾膜抗A抗體發光，底片曝光二、免疫沉澱檢測法把非放射性抗體加到平板培養基中，當插入基因的表達產物被細菌分泌到菌落周圍時，就會與抗體反應形成“沉澱圈”。1.原理抗原——抗體凝集反應。檢測分泌型產物。2.方法對於不能被分泌到菌體外的蛋白質可先進行原位溶菌處理（溶菌酶、原噬菌體誘發）。三、酶聯