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基因编辑技术的脱靶效应检测与降低

一、引言

基因编辑技术是一类能够对生物体基因组特定目标位点进行精准修饰的生物技术，从早期的锌指核酸酶、转录激活因子样效应物核酸酶，到后来广受关注的成簇规律间隔短回文重复序列相关系统，基因编辑的操作门槛不断降低、编辑效率持续提升，已经成为生命科学基础研究、生物医药研发、农作物遗传改良等领域不可或缺的核心工具，在单基因遗传病治疗、肿瘤免疫细胞开发、作物抗逆性状选育等场景展现出巨大的应用潜力（Doudna等，2020）。随着技术逐步从实验室研究向临床应用、产业落地推进，其安全性问题始终是学界、监管部门和公众关注的核心焦点，其中脱靶效应带来的非预期基因组突变，更是制约基因编辑技术大规模应用的关键瓶颈。

所谓脱靶效应，是指基因编辑工具在发挥作用时，没有准确结合到预设的靶位点，而是错误结合到基因组的其他位置，引发非预期的DNA切割和编辑事件，进而导致基因组出现插入缺失、点突变、结构变异等异常改变。早在基因编辑技术应用初期，就有研究发现常用的CRISPR-Cas系统在人类细胞中存在不可忽视的非特异性切割风险，高活性的核酸酶可能在没有完全序列匹配的位点引发双链断裂，若未经过严格评估就用于临床治疗，可能导致细胞恶性转化、免疫异常、功能紊乱等严重不良反应；若用于农业育种，则可能带来农艺性状非预期改变、食品安全隐患等问题（Zhang等，2014）。

要实现基因编辑技术的