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羊膜间充质干细胞原代分离培养标准操作规程

一、引言

羊膜间充质干细胞（hAMSCs）因其来源广泛、取材相对无创、免疫原性低及多向分化潜能等特性，在再生医学及细胞治疗领域展现出巨大应用前景。为确保hAMSCs原代分离培养过程的标准化、规范化，提高细胞质量与实验结果的可重复性，特制定本规程。本规程旨在为相关研究人员提供一套严谨、实用的操作指引。

二、主要试剂与材料准备

（一）试剂

1.基础培养基：选用低糖DMEM或α-MEM培养基，添加适量胎牛血清（FBS，经筛选，确保无支原体污染及良好促增殖效果）、青霉素-链霉素双抗溶液（终浓度通常为常规工作浓度）。

2.消化液：0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液；或根据实验需求选用胶原酶（如胶原酶IV型）与中性蛋白酶（如Dispase）的混合消化液，具体比例及浓度需预实验优化。

3.平衡盐溶液：PBS（不含钙镁离子），用于组织清洗及细胞洗涤。

4.其他试剂：75%医用酒精、无菌水。

（二）材料与耗材

1.采样容器：无菌广口瓶，内含适量含双抗的PBS或基础培养基。

2.培养器皿：60mm/100mm细胞培养皿、离心管（15mL、50mL）、移液管（1mL、5mL、10mL、25mL）、巴氏吸管。

3.手术器械：眼科剪、眼科镊（直头、弯头）、组织剪、止血钳，均需高压灭菌。

4.过滤器材：100目、200目细胞筛网。

三、主