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血液细胞外囊泡分离技术及其在肿瘤诊断中的应用规范总结2026

近年来，细胞外囊泡（extracellularvesicles，EV）成为肿瘤生命科学研究领域的热点，肿瘤源性的EV有望成为肿瘤无创检测的新型生物标志物，它同循环肿瘤细胞和循环肿瘤DNA一并被称为肿瘤液体活检指标，具有无创及可动态监测等临床优势。然而，由于EV的直径较小，从生物样本中提取分离具有一定难度。EV分离和检测技术的开发蓬勃发展，但目前国际上尚无统一的分离提取标准?［?1］?。具有临床应用前景的技术应具备样品和试剂消耗少、省时、简便、分离度高、成本低等优势。

一、EV分离技术

现阶段肿瘤EV分离纯化技术体系丰富，不同分离策略的性能特征、适用条件及产出样本质量等也存在差异。

（一）差速超速离心

差速超速离心为EV分离公认金标准，科研应用最广，适配多类样本；经分步离心逐级剔除杂质，可得到较高纯度EV?［?1］?。常规流程先以10000~20000×?g离心10~90min粗富集EV，再以100000~200000×?g离心45~150min去除轻质杂颗粒，沉淀重悬得到EV。提升离心力或时长可增加产量，但易共沉淀杂蛋白；通过添加蔗糖、碘克沙醇、氯化铯等介质的密度梯度离心，可依据沉降差异分馏收集同密度高纯度EV?［?1,2］?。总体来说，该体系整体耗时久、回收率偏低、设备要求高，且高离心力易破坏