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一代测序病理检测技术指南（2026版）

第一章技术原理与核心价值

高通量测序技术，即一代测序技术，其核心原理在于链终止法。该方法利用双脱氧核苷三磷酸在DNA合成过程中随机终止链的延伸，通过电泳分离不同长度的片段，并读取末端碱基，从而获得目标片段的精确序列信息。在病理检测领域，该技术的核心价值在于其无可比拟的测序准确度，通常可达到99.999%，使其成为基因突变检测的金标准。特别是在对已知关键位点进行验证性检测、对短片段靶向区域进行深度测序，以及对其他高通量测序技术（如下一代测序）发现的疑似突变进行确认时，一代测序展现出不可替代的精准性。其单次运行可处理的样本量适中，适用于对有限数量临床样本的特定基因靶点进行高可信度分析，为临床诊断提供决定性证据。

第二章实验室标准操作流程

实验室操作流程的规范是确保检测结果准确可靠的基础。整个流程始于样本的接收与评估。病理科接收的样本类型包括福尔马林固定石蜡包埋组织、新鲜冷冻组织、细胞学涂片或体液沉淀细胞块。评估需记录样本编号、患者信息、样本类型、固定时间及质量。对于FFPE样本，需特别评估其降解程度，确保提取的DNA片段长度能满足后续PCR扩增的要求。

核酸提取是后续检测成功的关键步骤。针对FFPE样本，推荐使用经过优化、可有效去除交联并修复DNA损伤的专用提取试剂盒。提取过程中需设立阴性对照（无模板对照）以监控提取过程中的污染。提取后的DN