蔬菜作物抗逆性基因组编辑育种技术规程-技术要点明白纸.pdfVIP

SDNY0064-2025

蔬菜作物抗逆性基因组编辑育种技术规程

起草人员：杨煜、杨晓慧、郭晓、董道峰、陈广侠、王永强、赵朋、田延平、

胡林双、刘芳。

起草单位：山东省农业科学院、山东农业大学、德州学院。

1.前期准备：靶点设计与载体构建（实验室阶段）

（1）找基因：根据目标（抗旱/耐盐碱/抗病）在数据库中找作物对应的基因序列，

特别提醒多倍体作物注意不同拷贝差异。

（2）设计剪刀（sgRNA）：用多个在线软件同时设计，挑所有软件都推荐的序列

注意敲除基因时，靶点尽量靠近基因开头。

（3）验证靶点：PCR扩增靶点区域，送测序确认实际序列与数据库一致。注意

每样品送3～5个克隆测序，防遗漏。

（4）设计引物：用NCBIPrimerBlast设计，产物大小500～1200bp。注意靶点

离引物至少150bp以上。

（5）构建载体：把sgRNA装入载体，推荐用tRNA-sgRNA系统（一个启动子

驱动多个sgRNA）。

（6）预检验：sgRNA+Cas9蛋白在试管中切割靶点DNA，跑胶看能否切开，切

不开或脱靶严重则重新