分子生物学（杨洋）第九章分子生物学技术.pptxVIP

ChapterNine·TechniquesofMolecularBiology分子生物学技术授课教师：杨洋教授华中科技大学

Contents本章内容概览分子生物学核心技术与方法论体系01核酸技术：电泳、酶切、克隆、PCR与杂交02蛋白质技术：分离纯化与分析方法03DNA-蛋白质相互作用研究技术04蛋白质-蛋白质相互作用研究技术

CHAPTER01核酸技术NucleicAcidsTechniques：电泳分离、酶切、克隆、PCR与杂交

MolecularBiology凝胶电泳基本原理凝胶电泳（GelElectrophoresis）是依据核酸分子的大小、形状和拓扑学性质进行分离的核心技术。DNA和RNA分子带负电荷，在电场中通过胶支持物的孔隙向正极迁移，迁移速率与分子量成反比，从而实现不同大小核酸片段的有效分离。琼脂糖凝胶电泳中DNA条带在紫外灯下的荧光成像DNA和RNA分子因磷酸骨架带均匀负电荷，在电场中从负极向正极移动，迁移方向确定且可预测线状DNA分子的电泳迁移率与分子量成反比，大分子移动慢、小分子移动快胶支持物呈果冻状多孔结构，充当分子筛角色，允许大分子通过但对其施加更大的阻力DNA条带可通过荧光染料染色后在紫外灯下观察，常用染料包括溴化乙锭和更安全的替代染料

MOLECULARBIOLOGYDNA拓扑结构对电泳迁移率的影响相同分子量的DNA分子，