植物与微生物的相互作用.pptVIP

植物肿瘤二、植物基因表达载体天然的Ti质粒不能作为表达载体使用：

a.被转化的植物细胞产生大量的生长素和细胞分裂素，导致肿瘤的形成，阻止了细胞再生长为整株植物，因此，必须除去生长素和分裂素基因。

b.冠瘿碱的合成与T-DNA的转化无关，而且可能会影响植物细胞生长，因为冠瘿碱合成大量消耗精氨酸和谷氨酸，因此必须去除冠瘿碱合成基因（tmt)

c.Ti质粒约为200kb，重组操作非常困难，也很难找到单一的酶切位点。

d.Ti质粒不能在大肠杆菌中复制，为了使重组质粒DNA的大量扩增，须添加入大肠杆菌复制子。植物细胞中一般不存在质粒，为利用农杆菌的Ti质粒，发展了共整合系统和双元载体系统，避免了在大的Ti质粒上进行分子重组操作的困难。1.植物细胞转化的共整合系统

T-DNA克隆在大肠杆菌质粒上,含有E.coli的选择标记和植物选择标记Kan+。首先在E.coli中筛选重组分子,然后将重组质粒转化到农杆菌中,质粒与Ti质粒上的同源序列发生同源重组,将外源基因整合到Ti质粒上,用于侵染植物细胞。T-DNA重组分子整合到植物细胞染色体DNA上,Kan+筛选转化细胞。共整合载体大肠杆菌质粒农杆菌Ti质粒重组农杆菌Ti质粒2.植物细胞转化的双元系统

目前T-DNA转化植物细胞的标准方法是双