传统荧光和TSA多重免疫荧光能一起染吗？.docxVIP

传统荧光和TSA多重免疫荧光能不能搭配染？

手里已经有荧光抗体，又想做TSA多重免疫荧光，难道只能全部重新买？

做免疫荧光的老师，应该经常遇到这样的情况：

手里已经有几个验证成熟的荧光抗体，信号也不错；

但随着课题深入，需要检测的Marker越来越多，传统免疫荧光开始遇到灵敏度、通道数量以及多指标共染等限制。

于是很多老师会考虑：

能不能把传统荧光和TSA多重免疫荧光结合起来？

答案是：

可以搭配，但不能简单“混着染”。

真正需要解决的问题是：

哪些Marker用传统荧光？哪些Marker用TSA？两套体系应该按照什么顺序进行？

尤其有一个非常关键的原则：

如果要将TSA与传统免疫荧光结合，通常建议优先完成TSA染色，再进行传统免疫荧光染色。

为什么？

①传统荧光和TSA，到底有什么区别？

传统免疫荧光通常依赖荧光标记抗体直接产生信号：

一抗→荧光二抗→荧光信号

优点是操作相对直接，对于表达量较高、信号较强、已经验证成熟的Marker，传统荧光完全可以满足检测需求。

但当Marker表达较低、组织背景较高，或者需要同时检测多个指标时，传统IF可能逐渐受到限制。

TSA则采用不同的信号产生方式：

一抗→HRP二抗→TSA荧光底物→信号放大与沉积

TSA利用酪胺信号放大原理，将荧光信号沉积在目标区域，从而获得更强的检测信号；完成一轮染色后，还可以通过抗体洗脱等方式