（共14页PPT）第5讲第二章第一节基因工程的工具酶.pptVIP

湖南师范大学生命科学学院第5讲工具酶（二）基因工程第二章基因工程工具酶和载体湖南师范大学生命科学学院袁婺洲本章目录2.1工具酶2.2克隆载体2.3表达载体限制性核酸内切酶DNA连接酶DNA聚合酶碱性磷酸酶末端转移酶其他工具酶第一节工具酶三、大肠杆菌DNA聚合酶I大肠杆菌DNA聚合酶I的基本性质：5′→3′的DNA聚合酶活性5′→3′的核酸外切酶活性3′→5′的核酸外切酶活性大肠杆菌DNA聚合酶I的基本用途：缺口前移标记法制备32P标记的探针缺口前移法标记探针DnaseⅠ使DNA双链产生缺口DNA聚合酶将生物素标记的dNTP插入到缺口的3`端大肠杆菌DNA聚合酶I大片段（Klenow）Klenow酶的基本性质：大肠杆菌DNA聚合酶I经枯草杆菌蛋白酶处理，获得N端三分之二的大肽段，即为Klenow酶。Klenow酶仍拥有5′→3′的DNA聚合酶活性和3′→5′的核酸外切酶活性，但失去了5′→3′的核酸外切酶活性Klenow酶的基本用途补平由核酸内切酶产生的5′粘性末端DNA片段的同位素末端标记cDN