（共15页PPT）第8讲第二章第二节基因工程的克隆载体.pptVIP

湖南师范大学生命科学学院第8讲人工微小染色体基因工程第二章基因工程工具酶和载体湖南师范大学生命科学学院袁婺洲本章目录2.1工具酶2.2克隆载体2.3表达载体质粒噬菌体柯斯质粒人工微小染色体第二节克隆载体EcoRI酵母人工染色体（YAC）结构YAC载体应含有下列元件：酵母染色体的端粒序列酵母染色体的复制子酵母染色体的中心粒序列酵母系统的选择标记大肠杆菌的复制子大肠杆菌的选择标记YAC载体的装载量为800-1000kb，1-2MbpYAC4CEN4URA3TELBamHITELoriAprTRP1ARS1五、人工微小染色体穿梭载体（shuttlevector）是一类由人工构建的具有两种不同复制起点和选择记号，因而可在两种不同的寄主细胞中存活和复制的质粒载体。酵母人工染色体构建基优点：装载容量大酵母细胞克隆缺点：基因分离困难需亚克隆克隆载体的发展历史第一代：环状质粒，装载8-10个kb片段;第二代：经过改建的病毒，装载能力２０kb左右;第三代：cosmid,装载能力30-40kb;第四代:YAC,装载能力1-2Mb;第五代:新型载体:BAC,PAC,