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应聘实验技能测试题及答案

实验技能测试题

一、理论基础题（共40分）

1.（5分）在分子生物学实验中，提取总RNA时使用的DEPC水需要经过高压灭菌处理。请解释DEPC的作用机制及高压灭菌的必要性。

2.（5分）配制100mL1×PBS缓冲液（pH7.4），已知母液为10×PBS（含NaCl80g/L、KCl2g/L、Na?HPO?·12H?O14.4g/L、KH?PO?2.4g/L）。请写出具体配制步骤，并说明为何需要调节pH后再定容。

3.（10分）PCR实验中出现非特异性扩增条带，可能的原因有哪些？针对每种原因提出至少1种优化措施。

4.（10分）细胞传代培养时，若胰酶消化后细胞未完全脱落，显微镜下观察到细胞仍紧密贴壁。请分析可能的原因（至少4种），并给出对应的解决方法。

5.（10分）某实验需测定溶液中蛋白质浓度，选择BCA法而非Bradford法。请从实验原理、干扰物质、适用场景三方面说明选择BCA法的合理性。

二、操作技能题（共40分）

任务：从人外周血单个核细胞（PBMC）中提取总RNA，并进行qPCR检测某目的基因（GAPDH为内参）的相对表达量。

要求：

（1）写出完整实验流程（包括前处理、试剂准备、关键操作步骤及注意事项）；

（2）列出所需主要仪器与耗材（至少10项）；

（3）若实验中发