酵母双杂交系统专家讲座.pptVIP

主要从以下几方面介绍

酵母双杂交系统概念原理优点与缺点应用优化酵母双杂交系统专家讲座第1页

酵母双杂交系统概念酵母双杂交系统是一个建立在酵母菌基础上遗传学分析方法,主要用于检测蛋白间相互作用及克隆与已知蛋白相关未知新基因。在功效基因组学和蛋白质组学研究中起主动促进作用。在细胞信号转导研究中,经过酵母双杂交系统能较全方面真实地反应细胞内信号蛋白网络性联络与调整。该法由Fields等人于1989年首次建立并得到广泛地应用。酵母双杂交系统专家讲座第2页

酵母双杂交原理利用酵母作为真核蛋白相互作用模型利用诱饵质粒筛选文库或者单个已知蛋白经过汇报基因转录判定蛋白相互作用使用不一样培养基筛选阳性克隆酵母双杂交系统专家讲座第3页

双杂交系统两个主要元件：转录激活因子：DNA结合结构域（DNAbindingdomain，简称为DB)和转录激活结构域（activationdomain，简称为AD)报道株：经改造、含报道基因重组质粒宿主细胞。最惯用是酵母细胞。酵母细胞作为报道株酵母双杂交系统含有许多优点①易于转化、便于回收扩增质粒；②含有可直接进行选择标识基因和特征性报道基因；③酵母内源性蛋白不易同起源于哺乳动物蛋白结合。酵母双杂交系统专家讲座第4页

酵母双杂交模型DNA-BindingDomainBaitProteinPreyProteinTranscriptionAc