MTT法检测细胞活力.pptVIP

精选课件*MTT法检测细胞活力

甘肃中医药大学精选课件*MTT法目的和意义检测细胞存活和生长情况用于评价药物产生的细胞毒作用精选课件*原理四唑盐（噻唑蓝)是一种能接受氢原子的染料，简称MTT活细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO)能溶解细胞中的紫蓝色结晶物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量，从而反映细胞的增殖情况。在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与活细胞数成正比。精选课件*活细胞+MTT琥珀酸脱氢酶紫蓝色结晶物Formazan精选课件*贴壁细胞操作步骤1.??接种细胞：用0.25%胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含血清的培养液配成单个细胞悬液，以每孔2000-3000个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积90ul。（边缘孔用PBS或空白培养基填充)。

2.??培养细胞：将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5%CO2及饱和湿度条件下培养，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板，大约12h)，加入浓度梯度的药物。原则上，细胞贴壁后即可加药，每孔加药10ul，一般设5个复孔。3.5%CO2，37℃孵育分别孵育24小时后，倒置显微镜下观察。精选课件*4.