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T细胞受体亲和力试验规范

1.试验前期准备规范

1.1样本采集与预处理要求

T细胞受体（TCR）亲和力试验的样本需优先选择EDTA抗凝的新鲜外周静脉血，采血量不得少于10mL，样本采集后需在2小时内转移至4℃冷藏环境储存，最长储存时间不超过24小时。若使用冻存的外周血单个核细胞（PBMC）样本，冻存时细胞浓度需控制在(1-5)×10^6个/mL，冻存液配方为90%胎牛血清+10%二甲基亚砜（DMSO），程序降温速率需严格控制为每分钟下降1℃，最终保存于液氮气相环境，避免反复冻融。

样本预处理阶段需采用密度梯度离心法分离PBMC，离心参数设置为2000r/min、室温离心20分钟，离心后小心吸取白膜层细胞，用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤2次，每次洗涤后1500r/min离心5分钟，弃去上清。使用台盼蓝染色法检测细胞活性，活细胞率需达到95%以上方可进入后续试验步骤，若活细胞率低于90%需重新采集样本。对于肿瘤组织来源的T细胞样本，需先采用机械剪切法将组织剪切成1mm3左右的小块，再用含0.1%Ⅳ型胶原酶的RPMI-1640培养基37℃消化1小时，经70μm细胞筛过滤后获得单细胞悬液，再按照PBMC处理流程洗涤、计数。

1.2试剂与耗材质量控制

试验所用的主要试剂包括pMHC四聚体、T细胞培养基、封闭抗体、荧光标记的抗CD3/CD4/CD8抗体等，所有试剂需具备批间一致性验证报告，