蛋白表达纯化案例解析课件.pptxVIP

CASESTUDY蛋白表达纯化案例解析从基因构建到高纯蛋白的典型案例全流程2026

课程导览01表达系统与载体构建原核表达的原理基础02诱导表达与条件优化产量与可溶性的调控03包涵体复性实战破解不溶性表达难题04亲和层析纯化His与GST标签路径05多步纯化与质控高纯度工艺链构建06产业应用与前沿展望从实验室到产业化

CHAPTER表达系统与载体构建选对系统，是成功表达的第一步01

BL21(DE3)为何成为表达首选宿主高效转录+低降解=高产量原料基础双重T7系统转录提速·表达高效IPTG激活lacUV5启动子→合成T7RNA聚合酶→识别pET载体T7启动子，转录速度远超宿主自身聚合酶。蛋白酶缺陷低降解·充分积累缺失lon和ompT两个蛋白酶基因，外源蛋白不易被降解，得以充分积累。

pET载体的精密调控逻辑严格关闭无IPTG时，LacI阻遏蛋白结合lacO操纵基因物理阻断转录，基础表达极低关闭态诱导即开加入IPTG后，阻遏蛋白构象改变并解离T7启动子全力驱动转录开启态高表达目的蛋白表达量可达菌体总蛋白的30%以上T7启动子转录效率极高，驱动强力表达产量防泄漏避免毒性蛋白在诱导前泄漏损害宿主保障宿主健康与质粒稳定宿主安全可控调表达水平由质粒拷贝数×启动子强度决定通过IPTG浓度与诱导时机灵活控制最终表达水平精准调控

宿主菌株的选择与适配常