基因编辑脱靶检测与修复策略训练大纲.docVIP

基因编辑脱靶检测与修复策略训练大纲

一、基因编辑技术基础模块

（一）主流基因编辑系统原理

CRISPR-Cas系统

CRISPR-Cas系统是目前应用最广泛的基因编辑工具，其工作原理源于细菌的适应性免疫机制。该系统主要由CRISPR序列和Cas蛋白两部分组成。CRISPR序列是一段包含重复序列和间隔序列的DNA片段，间隔序列来源于细菌曾经遭遇过的噬菌体或质粒DNA。当细菌再次遇到相同的病原体时，CRISPR序列会转录成pre-crRNA，随后在Cas蛋白的作用下被加工成成熟的crRNA。crRNA会与tracrRNA结合形成复合物，引导Cas蛋白识别并结合到与crRNA互补的靶DNA序列上，然后Cas蛋白发挥核酸酶活性，对靶DNA进行切割，造成DNA双链断裂（DSB）。

根据Cas蛋白的不同，CRISPR-Cas系统可以分为多种类型，其中Cas9和Cas12a是应用较为广泛的两种。Cas9蛋白需要识别特定的PAM序列（原间隔相邻基序）才能对靶DNA进行切割，不同的Cas9蛋白识别的PAM序列有所不同，例如SpCas9识别的PAM序列为NGG。Cas12a蛋白则具有独特的特点，它不需要tracrRNA，并且在切割DNA时会产生粘性末端，这有利于后续的DNA修复。

ZFNs（锌指核酸酶）

ZFNs是一种人工改造的核酸酶，由锌指蛋白结构域和FokI核酸酶结构域组成。锌指蛋白结构域能够特异