基因工程lecture5-DNA-cloning剖析.pptVIP

**GeneticEngineeringDr.ZhengXuesongShanghaiInstituteofTechnologyChapter5DNAcloning*5.1StrategyandprotocolsforDNACloning*基因克隆基因克隆又称DNA克隆,其中的一项关键技术是重组DNA技术。重组DNA是用酶学方法,将不同来源的DNA分子在体外进行特异切割、重新连接,组装成一个新的杂合DNA分子。在此基础上,这个杂合分子能够在一定的宿主细胞中进行扩增,形成大量的子代分子,此过程称基因克隆。*基因克隆的技术路线①分离制备待克隆的外源DNA片段②将靶DNA片段与载体连接,组装成重组DNA分子(recombinantDNA)③重组DNA分子转入宿主细胞④筛选重组子⑤重组子的扩增和目的基因的分析*5.2目的基因的来源1.构建genomelibrary,从中获得特定基因2.从mRNA构建cDNAlibrary,富集了所需基因3.人工合成DNA片段4.PCR扩增特定基因片段*把DNA分子切割或连接成易于与载体连接的片段。单酶切和多酶切;完全酶切和部分酶切;DNA片段的回收。5.3DNA分子的片段化*Partialrestrict