（共16页PPT）第14讲第三章第二节常规PCR技术.pptVIP

湖南师范大学生命科学学院第14讲常规PCR技术基因工程第三章目的基因的制备与鉴定湖南师范大学生命科学学院袁婺洲3.1从获取目的基因3.2PCR技术获取与扩增目的基因3.3从基因组数据库获取目的基因3.4通过蛋白质工程改建目的基因3.5转化体中目的基因的鉴定本章目录第二节PCR技术获取与扩增目的基因常规PCR反向PCR反转录PCR实时荧光定量PCR多重PCR巢式PCR不对称PCR一、常规PCR技术PCR叫多聚酶链式反应，是利用碱基互补配对的原则，经过模板DNA的高、低以及DNA聚合酶的子链延伸等多次循环，在体外快速扩增合成DNA的一种方法。1985年由美国Cetus公司Mullis发明1、PCR反应的原理2、PCR反应体系的成分？？模板DNA一对引物dNTPsTaq酶缓冲液Mg2+超纯水PCR引物设计原则？？①长度：18～30bp②GC含量40-60%③Tm值高于55度④尽量减少引物与模板非特异性配对位点⑤两条引物间配对碱基数小于3⑥因克隆需要，有时要在引物两端加上一段酶切序列1=94°C2min