荧光素酶报告基因测定法.pptVIP

2023荧光素酶报告基因测定法汇报人:文小库

实验原理与技术概述实验目的与设计实验材料与试剂准备实验操作流程数据分析方法常见问题与解决方案contents目录

实验原理与技术概述01

催化D-荧光素与ATP反应,产生波长560nm的黄绿色光,需Mg2?和O?参与,发光半衰期约30分钟,适用于长时间信号监测。萤火虫荧光素酶（FireflyLuciferase)以腔肠素为底物，发射波长480nm的蓝光，反应不依赖ATP，发光强度高但衰减快（半衰期1分钟)，适合瞬时检测。海肾荧光素酶（RenillaLuciferase)分泌型酶,催化腔肠素氧化产生470nm蓝光,信号强度是海肾酶的1000倍,适用于高通量筛选和无裂解检测。高斯荧光素酶（GaussiaLuciferase)荧光素酶的分类与发光机制

人工改造的19kDa小分子酶，使用呋喃嗪底物，发射460nm光且稳定性极佳（半衰期2小时)，灵敏度较传统酶高100倍。纳米荧光素酶（NanoLuc)由lux操纵子编码,催化长链脂肪醛氧化,发射490nm蓝绿光,无需外源底物,适用于原核生物实时成像。细菌荧光素酶（BacterialLuciferase)荧光素酶的分类与发光机制

启动子报告基因检测系统应用方向技术优势荧光素酶基因受启动子调控表达,反映转录活性水平。转录调控荧光素