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*3.显微注射法制备转基因动物步骤♂♀外源基因鉴定方法：PCRSouthern结扎公鼠成年雌鼠假孕雌鼠DNA构件*超数排卵雌鼠10只有阴栓雌鼠数6～8只获得的受精卵数200～300个可注射的雄性原核卵数150～250个显微注射后存活的卵数100～200个每个受体移卵数20～40个受体数3～6只超数排卵与转基因实验*显微注射法制备转基因动物*显微注射法的优缺点优点：方法经典，简便、可靠缺点：显微注射的整合率低，只有5%。只能加入基因，不能剔除或原位修饰。整合是随机的，由于插入位点的关系，转基因表达有不确定性，有的高，有的低。由于是随机整合，可能破坏重要的内源性DNA序列或激活细胞的致癌基因。用原核显微注射产生的转基因动物常常是嵌合体，即并不是所有细胞都整合有外源基因。不能在胚胎早期确定性别。*二、逆转录病毒法制备转基因动物（一)原理逆转录病毒是一类具有逆转录酶的RNA病毒，能将病毒RNA逆转录成双链DNA，进而整合到细胞染色体DNA中。利用