第三章细胞破碎.pptVIP

各种试剂的不同作用机理，将几种试剂合理地搭配使用能有效地提高胞内物质的释放率。例：单独用0.1mol/L盐酸胍处理E.coli仅释放约1%的蛋白质0.5%TritonX-100处理蛋白质释放率为4%二者合用，蛋白质释放率可达53%左右。化学渗透法的优点:①对产物释放具有一定选择性。可使一些较小分子量的溶质如多肽和小分子的酶蛋白透过,而核酸等大分子量的物质仍滞留在胞内。②细胞外形保持完整,碎片少,浆液粘度低,易于固液分离和进一步提取。化学渗透法的缺点:（1)通用性差，某种试剂只能作用于某些特定类型的细胞。（2)时间长，效率低，一般胞内物质释放率不超过50%。（3)有些化学试剂有毒性。温度——温度高时细胞较易破碎,但要考虑目的产物不受破坏。一般温度控制在5～40℃内时影响较小。搅拌转速——过高将使能量消耗大增,而破碎率上升不明显。破碎率的控制:破碎率高时，单位破碎细胞的能耗明显上升；高破碎率产生较多的热能，增大了冷却控温的难度；破碎率越高，细胞碎片越小，分离碎片越困难；高破碎率下，目的产物的失活损失增加。（珠磨法的破碎率一般控制在80%以下，并兼顾下游过程)高压匀浆法(High-pressurehomogenization)——大规模细胞破碎的常用方法工作原理:细胞