细胞系与细胞克隆研究生教学.pptVIP

可编辑版*教学目的:1、掌握传代培养的概念和方法2、了解细胞系的建立过程3.掌握克隆细胞的几种方法可编辑版*细胞系cellline:原代培养物经首次传代后即成。有限细胞系finitecellline:不能继续传代或传代数有限。连续细胞系continuouscellline:可连续传代的细胞系，即已建成的细胞系。细胞株cellstrain:通过选择法和克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质和标志的培养物。可编辑版*一、传代培养（passage)概念:无论是否稀释，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶。可编辑版*（一）传代培养的方法1.从生长器皿上解离细胞的方法：1）震荡法。2）胰蛋白酶消化法3）胰蛋白酶-柠檬酸盐4）用EDTA洗细胞再用胰蛋白酶-柠檬酸盐处理5）EDTA洗再用胰蛋白酶-EDTA消化6）EDTA洗再用胰蛋白酶-胶原酶配合柠檬酸盐或EDTA消化7）机械刮削法（scraping）8）分散酶（0.1mg/ml)或蛋白酶(0.1-1.01mg/ml)可编辑版*2.单层培养细胞的一般传代步骤:倒出旧液PBS洗涤胰蛋白酶消化吸出消化液加入培养液吹散细胞计数稀释培养可编辑版*离