第2章蛋白质的结构与功能.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * 体内大多数蛋白质为负电荷，但也有例外。（各举一例） * * 蛋白质是生物大分子，蛋白质溶液是稳定的胶体溶液，具有胶体溶液的特征，其中电泳现象和不能透过半透膜对蛋白质的分离纯化都是非常有用的。蛋白质之所以能以稳定的胶体存在主要是由于： （1）蛋白质分子大小已达到胶体质点范围（颗粒直径在1～100nm之间），具有较大表面积。 （2）蛋白质分子表面有许多极性基团，这些基团与水有高度亲和性，很容易吸附水分子。实验证明，每1g蛋白质大约可结合0.3～0.5g的水，从而使蛋白质颗粒外面形成一层水膜。由于这层水膜的存在，使得蛋白质颗粒彼此不能靠近，增加了蛋白质溶液的稳定性，阻碍了蛋白质胶体从溶液中聚集、沉淀出来。 （3）蛋白质分子在非等电状态时带有同性电荷，即在酸性溶液中带有正电荷，在碱性溶液中带有负电荷。由于同性电荷互相排斥，所以使蛋白质颗粒互相排斥，不会聚集沉淀。 蛋白质的胶体性质具有重要的生理意义。在生物体中，蛋白质与大量水结合形成各种流动性不同的胶体系统，如细胞的原生质就是一个复杂的胶体系统。生命活动的许多代谢反应即在此系统中进行。 如果这些稳定因素被破坏，蛋白质的胶体性质就会被破坏，从而产生沉淀作用。所谓蛋白质的沉淀作用是指在蛋白质溶液中加入适当试剂，破坏了蛋白质的水化膜或中和了其分子表面的电荷，从而使蛋白质胶体溶液变得不稳定而发生沉淀的现象。下列方法可使蛋白质产生沉淀并可有效地用于蛋白质的分离。 （一）盐析 在蛋白质溶液中加入一定量的中性盐（如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）使蛋白质溶解度降低并沉淀析出的现象称为盐析（salting out）。这是由于这些盐类离子与水的亲和性大，又是强电解质，可与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质颗粒表面的水膜。另外，大量中和蛋白质颗粒上的电荷，使蛋白质成为既不含水膜又不带电荷的颗粒而聚集沉淀。盐析时所需的盐浓度称为盐析浓度，用饱和百分比表示。由于不同蛋白质的分子大小及带电状况各不相同，所以盐析所需的盐浓度不同。因此，可以通过调节盐浓度使混合液中几种不同蛋白质分别沉淀析出，从而达到分离的目的，这种方法称为分段盐析。硫酸铵是最常用来盐析的中性盐。 另外，当在蛋白质溶液中加入中性盐的浓度较低时，蛋白质溶解度会增加，这种现象称为盐溶（salting in），这是由于蛋白质颗粒上吸附某种无机盐离子后，使蛋白质颗粒带同种电荷而相互排斥，并且与水分子的作用加强，从而溶解度增加。 （二）调pH至等电点 当蛋白质溶液处于等电点pH时，蛋白质分子主要以两性离子形式存在，净电荷为零。此时蛋白质分子失去同种电荷的排斥作用，极易聚集而发生沉淀。 （三）有机溶剂 有些与水互溶的有机溶剂如甲醇、乙醇、丙酮等可使蛋白质产生沉淀，这是由于这些有机溶剂和水的亲和力大，能夺取蛋白质表面的水化膜，从而使蛋白质的溶解度降低并产生沉淀。此法也可用于蛋白质的分离、纯化。 以上方法分离制备得到的蛋白质一般仍保持天然蛋白质的生物活性，将其重新溶解于水仍然能成为稳定的胶体溶液。但用有机溶剂来沉淀分离蛋白质时，需在低温下进行，在较高温度下进行会破坏蛋白质的天然构象。 （四）重金属盐 当蛋白质溶液的pH大于其等电点时，蛋白质带负电荷，可与重金属离子（如Cu2+、Hg2+、Pb2+、Ag+等）结合形成不溶性的蛋白盐而沉淀。 （五）生物碱试剂 生物碱是植物组织中具有显著生理作用的一类含氮的碱性物质。能够沉淀生物碱的试剂称为生物碱试剂。生物碱试剂都能沉淀蛋白质，如单宁酸、苦味酸、三氯乙酸等都能沉淀生物碱。因为一般生物碱试剂都为酸性物质，而蛋白质在酸性溶液中带正电荷，所以能和生物碱试剂的酸根离子结合形成溶解度较小的盐类而沉淀。 * * * * 变性的一定沉淀，沉淀的不一定变性 * * * * * * * * 當你 忘記胺基酸的構造時，胸前畫個十字禱告奇蹟馬上出現。 你只要在這十字的中央，先填上一個碳原子 (叫做 a 碳)，在周圍的四個位置分別填上一個 胺基、酸基 (因為是寫胺基酸構造)、氫原子 及一個 R 基團，基本的胺基酸構造即完成。 R 基團可以由最簡單的 H 開始填入，就是最簡單的 glycine；再來 CH3 就是 alanine；如此越來越大，並加入其它種類的原子 (如氧或硫)，或額外的胺基、酸基或醇基，就可以組成多采多姿的二十種胺基酸。 請注意 a 碳是不對稱的，因為它周圍的四個原子或基團都不相同；只有當 R 基團為氫原子時，是對稱的 a 碳 (因為接有兩個一樣的氫原子)；也就是說只有 glycine 是對稱的胺基酸。 因此，除了 glycine 外，其它胺基酸都有其立體異構物，兩立體異構物間的化學式完全一樣，但互相成為鏡像，胺基酸的立體異構物以 L- 及 D