细菌荚膜多糖的纯化_分析及免疫原性的研究现状.pdfVIP

1997; 16(3) :216~ 2 18 J ournal of Nanj ing Railway Medical College 、 X (南京铁道医学院微生物学教研室 南京 210009) 有荚膜细菌包括脑膜炎球菌、肺炎球菌、肺炎杆 作任何处理。 菌、流感嗜血杆菌、葡 球菌、大肠杆菌和假单胞菌等, 细菌培养方式可采用振荡培养法或静置培养法, 可引起人类多种疾病。尽管临床上有多种抗菌药物可 前者一般要求振荡次数在100 次#min- 1分以上。在这 供选择, 但由于有荚膜细菌耐药菌株明显增加, 所致疾 一条件下, 荚膜多糖可游离到培养液中, 离心去掉细菌 病的发病率和死亡率仍很高。因此, 不少学者正努力 后, 可直接从培养液中纯化荚膜多糖; 采用静置培养法 探索预防这些疾病的途径。目前, 有荚膜细菌菌苗的 时, 荚膜多糖仍旧结合在菌体上, 离心收集细菌, 加 研究主要集中在研制荚膜多糖的疫苗方面。本文就其 1% 苯酚或万分之一的硫柳汞杀菌后, 荚膜多糖溶解在 分纯制备以及机体对纯化的荚膜多糖的免疫反应作一 [4] 水相, 再从水相中制备荚膜多糖 。 综述。 纯化荚膜多糖, 目前多采用沉淀法和凝胶层析法, 1 荚膜多糖的化学性质 或两者相结合的方法。凝胶层析法影响因素少, 纯化 环境温和, 因而多糖破坏少, 但费时费力, 每次分离量 大多数细菌荚膜多糖是由2 种或2 种以上的单糖 少; 而且, 在相对分子质量估计不清楚时, 凝胶的选择 重复组成的长链结构, 为酸性粘多糖, 属杂多糖类。也 有一定困难。沉淀法多采用乙醇、丙酮及长链季胺盐 有一些细菌荚膜多糖由乙酰化的同质多糖组成, 如伤 类作沉淀剂, 该方法无凝胶层析法的缺点, 但纯化环境 寒杆菌的Vi 抗原就是由NO乙酰O半乳氨基糖醛酸残基 不够温和, 影响因素亦较多。50 年代, Scott 首先发现 所组成。根据血清学反应的差异, 推测肺炎杆菌荚膜 16 烷基3 甲基溴化胺(Cetavlon) 对酸性多糖有较强的 多糖至少有77 种不同的化学结构。迄今, 绝大多数细 沉淀作用, 能与多糖形成季胺络合物而沉淀多糖。目 菌荚膜多糖的化学结构已经确定。在这些多糖分子 前, Cetavlon 已广泛用于各种细菌荚膜多糖的纯化制 中, 长链结构的非还原端是最远端, 是这些多糖分子的 备, 但含有磷壁质酸的革兰阳性细菌或被磷壁质酸污 抗原决定簇, 并能诱导抗体的产生。而多糖长链结构 染的荚膜多糖, 不易被 Cetavlon 所沉淀。Cetavlon 对 的中间部分一般不能诱导抗体的产生。细菌荚膜多糖 酸性多糖沉淀作用较强, 但对中性多糖、核酸和蛋白质 主要以共价键形式与菌体结合[1~ 2] 。 等物质亦有不同程度的沉淀作用。因此, 要获得成分 2 荚膜多糖的分纯制备 均一、纯度较高的荚膜多糖, 必须进一步去除可能一起 沉淀的核酸或蛋白质类。去除核酸可采用低浓度乙醇 大分子多聚糖或杂多糖的分纯制备较游离的单 沉淀或核糖核酸酶消化; 去除蛋白多采用Sevag 法, 也 糖、小分子寡糖及蛋白质的提纯要复杂。革兰阴性菌 有人用链霉蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶对粗制多糖先 外膜的脂多糖( 内毒素) 结构不够稳定, 在纯化这类多 进行消化, 然后用Sevag 法处理, 效果较好。去除脂多 糖时, 不可避免地会被自身的脂多糖所污染。Ander2 糖主要依赖长时间的超速离心处理。一般认为 100 son[ 3] 纯化b 型流感嗜血杆菌的多聚核糖磷酸时, 证实 000 @g 连续离心4 h 以上, 脂多糖即可与荚膜多糖分 了这种污染的存在。另外, 许多细