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实验三 水中细菌总数的测定 一.实验目的： 1.学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法； 2.了解水源水的平板菌落计数的原则。 二.实验原理： 本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。 由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出水中细菌总数仅是一种近似值。 目前一般是采用肉膏蛋白胨琼脂培养基。 本实验以普通肉膏蛋白胨琼脂培养基，采用平板菌落计数技术来分别测定自来水和河水中的细菌总数。 三、实验操作 1.水体取样： 应取距水面10～15cm的深层水样。先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水立即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出。 2. 自来水取样： 打开自来水龙头，让水流流出1min左右，用烧杯接取自来水。 3. 将河水水样分别稀释成10-1、10-2、10-3三个连续稀释浓度（注意：在稀释前后一定要充分混匀）、自来水样不稀释。 注意：河水样的稀释，取1个灭菌空试管，加入9mL灭菌水。用取过灭菌水的移液管取1mL河水样，放入试管中，振荡试管混合均匀。 4.涂布平板法： 1.加热已经配制好的固体培养基（肉膏蛋白胨琼脂培养基），使固体培养基溶化。 2.倒制平板：每个空平皿中倒约20mL的培养基，放置桌面待其凝固。 3.用移液管吸取0.1mL水样，滴于平板中；将玻璃涂布棒于酒精灯的外焰上加热，杀死表面微生物，然后耐心待其冷却，然后用涂布棒将水滴均匀的涂满整个平板表面，尽量将水涂干。 5. 倒置于37度培养箱中培养24h。 6.菌落计数： 1.挑取无片状菌苔生长的平板作为计数平板，若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布很均匀时，可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数。 2.选择平均菌落数在30～300之间的平板来计算该水样的菌落总数。如果所有的平板的菌落总数都不在30—300范围之内，则取最靠近30—300的平板进行计数 3. 如果有两个稀释浓度的总菌落数落在了30—300范围之内，则先计算两个浓度下每ml水体中细菌总数，如果两个数值的比值大于2则取小的浓度，如若小于2则取两值的平均值。 * *
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