SOP-QC-011培养基配制标准操作规程.doc

1、玻璃器皿的洗涤。 1.1制备培养基所用的吸管、试管，三角瓶和平皿等新的玻璃器皿，因有灰尘和游离碱性物质，先用水冲洗干净。然后置3％的盐酸中浸泡约12小时。取出后，用清水冲洗干净， 再用蒸馏水冲洗1～2次，晾干后备用。 1.2凡各种装量大而又不宜高压的含糖培养基，所用的玻璃器皿应事先灭菌，以免因一次性低压灭菌不彻底而染菌。 2、用具包装与灭菌。 2.1硅胶塞：应用水冲洗干净，再以蒸馏水冲洗1～2次，烘干备用。 2.2试管：各种试管最好先配上合适的硅胶塞，待高压灭菌后再分装培养基，可防止污染。 2.3平皿：取洗净凉干的平皿， 每7 套作一个包装， 121℃ 30分钟灭菌后烘干备用；也可用160℃ 2小时干热灭菌后备用。 2.4供染菌限度检验用的吸管，应防止堵塞，故选用红刻度粗下口的。用前洗净烘干，上口塞进少许普通棉花，松紧适度，以防污染。然后按其容量大小，分别放在用双层牛皮纸作成的纸袋或者金属盒内，包严经121℃ 30分钟灭菌后烘干备用。 3、操作 3.1根据用途选择培养基，按其用法进行准确称量和加蒸馏水，并填写配制记录如名称、配制量、配比、配制日期、配制者。 3.2培养基完全溶解后，进行过滤和分装，液体培养基一般应澄清无沉淀，否则影响观察细菌生长的结果。过滤时可用滤纸或脱脂棉。 4、分装 4.1各种液体培养基分装试管时，每支应按试管大小及用途不同定量分装，可用吸管或注 射器分装，也可用漏斗分装。一般漏斗下口连接一段橡胶管，管口插一小段玻璃管，再加上一个弹簧夹控制流量，分装时将漏斗放在支架上，内装培养基，然后将下口插入试管中即可按量将培养基逐管分装，注意，不同品种的培养基用过的漏斗，应充分洗净后再用，以防两种培养基互相混淆，影响使用效果。 4.2固体培养基应趁热分装，以防冷后凝固：分装时也可用支架漏斗，但须注意勿将培养基沾污管口，以防污染杂菌。 4.3 制备固体斜面培养基时，每管装量宜少，堵严硅胶塞灭菌后摆成的斜面，凝固后应大小适宜，否则易染菌。 4.4制备琼脂平板， 一般先装在瓶内， 高压灭菌后冷至45～50℃时，再倾注平皿，凝固后置温箱内烘干凝结的水分备用。 5、灭菌 5.1各种培养基的灭菌时间和压力，一般按其品种的成分不同而定。耐热的多采用121℃灭菌15分钟（即15磅15分钟）； 但容器和装量较大时，可延长至20分钟。凡含有葡萄糖或其他糖类等不耐热的成分，宜用116℃灭菌20分钟（即10磅20分钟）； 如为装量较小的糖类发酵管，也可用110℃灭菌10 分钟（即8 磅10分钟），以防压力大、温度高、时间长破坏糖分。总之，应严格遵守各种培养基规定的灭菌温度和时间。 5.2高压灭菌应严格按照操作规程执行，必须逐渐加热，彻底排除灭菌器内的冷空气，使灭菌物品同器内的温度一致时，再逐渐升压保持预定的压力和时间之后，令其自然降压为宜。 6、培养基的保存 6.1环境条件：各种培养基均应在洁净的普通冰箱内保存，以5℃左右为宜，不得冻结。否则， 融化后常因理化条件改变而不能再用。 6.2保存时限 6.2.1基础营养培养基应在２周内用完。 6.2.2生化鉴别培养基应在１周内用完。 6.2.3选择性分离鉴别培养基制成平板后当日用完。 6.3管理 6.3.1贮存培养基的冰箱内不得存放食品、饮料等无关物品。 6.3.2 管理员应按规定的时间检查培养基的外观，如失水、沉淀、过期、棉花塞松弛或脱落等异常情况。发现问题及时处理。 7、培养基过滤澄清须注意： 7.1按培养基的制法说明进行加热或煮沸溶化后滤清。 须注意趁热时滤清，因在碱性溶液中加热煮沸后大部分沉淀物均可滤除，冷后较难滤净，灭菌后仍可出现沉淀物。 7.2滤除异物沉淀后，应将蒸发失去的液量按原液量加纯化水补足，以保证原有成分的配比量和理化性能。 文件编号：SOP-QC-011 文件名称：培养基配制标准操作规程 第 3 页 共 3页 **有限公司操作标准 标 题 培养基配制标准操作规程 文件编号 SOP-QC-011 起草人 起草日期 年 月 日 版 号 A 版 审核人 审核日期 年 月 日 共 3 页 第 1 页 批准人 批准日期 年 月 日 生效日期 年 月 日 颁发部门 质量部 颁发份数 3份 分发部门：化验室 目的：建立一个规范培养基配制操作的文件。 范围：适用于培养基配制操作。 责任：化验员。 内容：