ACQUITY TQD Training 关于waters液质连用的资料.ppt

ACQUITY TQD LC/MS/MS系统 ACQUITY TQD 离子通道 什么是质谱? 样品转变为气态离子。 利用离子在电场和磁场中的运行性质，将这些离子在真空状态下按其质荷比(m/z)进行分离。 质谱图就是一张以相对离子流强度为纵坐标、以质荷比(m/z)为横坐标的曲线图。 LC/MS 数据形式 LC/MS 数据形式 LC/MS 数据形式 LC/MS 系统构成 大气压电离技术 ESI Probe ESI源工作原理 电喷雾电离(ESI)是在液滴变成蒸汽，产生离子发射的过程中形成的，溶剂由液相泵输送到ESI Probe，经其内的不锈钢毛细管流出，这时给毛细管加2－4kv的高压，由于高压和雾化气的作用，流动相从毛细管顶端流出时，会形成扇状喷雾，使液滴生成含样品和溶剂离子的气溶胶。 由于毛细管被加高压，造成氧化还原反应，形成带电液滴。 溶剂蒸发，离子向液滴表面移动，液滴表面的离子密度越来越大，当达到Rayleigh极限时，即液滴表面电荷产生的库仑排斥力于液滴表面的张力大致相等时，液滴会非均匀破裂，分裂成更小的液滴，在质量和电荷重新分配后，更小的液滴进入稳定态，然后再重复蒸发、电荷过剩和液滴分裂这一系列过程。 对于半径10nm的液滴 , 液滴表面形成的电场足够强，电荷的排斥作用最终导致部分离子从液滴表面蒸发出来，而不是液滴的分裂 ，最终样品以单电荷或多电荷离子的形式从溶液中转移至气相，形成了气相离子。 多肽，蛋白等生物大分子，有多个可质子化基团，而且相距较远，在ESI环境中会生成多质子化分子（分子离子峰）。 离子所带电荷的多少取决于分子中酸性基团和碱性基团的体积和数量。 ESI 调谐窗口设置 所用气体 氮气（90PSI） 雾化气 脱溶剂气 锥孔气 氩气（15PSI) 碰撞气 ESI 调谐窗口设置 ESI 调谐窗口设置 ESI 的离子抑制现象 样品分子离子和电解质离子对电荷及占据液滴表面的竞争导致离子抑制，离子在液滴表面过于密集，制使某些样品分子离子不能到达液滴表面，这一现象叫离子抑制。 一般而言，被分析物的响应随其他的电解质浓度增高而降低。 ESI与溶剂的关系 大量实验证明ESI与溶剂密切相关，为促进样品的电离，要考虑以下因素 样品的结构特性，易形成正离子或负离子。 要有一定的中、高性的溶剂，以利于样品极化。 可利用挥发性酸、碱或其它电解质调节PH值，以利于形成正、负离子。 为维持稳定的电喷雾，要考虑溶剂表面张力。 多电荷离子 多电荷离子 蛋白 多电荷离子的解析 APCI Probe APCI源工作原理 APCI电离是在大气压条件下利用尖端高压（电晕）放电促使溶剂和其他反应物电离、碰撞，及电荷转移等方式，形成一个反应气等离子区，样品分子通过等离子区时，发生质子转移，形成了(M＋H) 或 (M-H)离子或加和离子。 快速蒸发，液流被强迫通过一根窄的管路使其得到较高的线速度，给毛细管高温加热及雾化气的作用使液流在脱离管路的时候蒸发成气体 通过电晕放电，达到气相化学电离 APCI源工作原理 APcI 调谐窗口设置 质子亲和力 质子亲合力 (PA) 是气相分子碱性的一个指标。 对于下述反应 SH+ + A→AH+ + S (S = 溶剂 , A = 被分析物) PA (A) PA (S) 只有当样品的质子亲和力大于溶剂的质子亲和力的时候,才与样品发生质子交换。 尽量选择质子亲和力(PA)低的溶剂。 常见组份的质子亲和力 Compound PA (kcal/mol) Compound PA(kcal/mol) HCl 135 Uracil 208 Formaldehyde 172 Pyridine 221 Furan 192 L-Methionine 221 p-Xylene 192 (C6H5)3P 230 Phenol 196 L-Lysine 230 Biphenyl 196 1,7-Diaminoheptane 238 Fluorene 200 Anisole 200 (C2H5)2S 205 气相APCI 化学负离子 PH值对 LC/MS分析的影响 Reverse phase HPLC pH adjusted to make analytes stick on the column MS electrospray positive ionization mode (ESI+) pH lowered with acid (e.g. 0.1% formic acid) to add H+ to the analyte to give + charge MS electrospr