2012届高三生物复习课件安徽用选修1第36讲DNA和蛋白质技术.pptVIP

知识内容 考纲要求 考纲理解 PCR技术的基本操作和应用 实验与探究能力 简述PCR技术的反应原理、基本操作和应用 多聚酶链式反应扩增DNA片段 1．生物体内DNA复制与PCR反应的比较 条件 ①稳定的缓冲液环境；②DNA模板；③分别与模板DNA两条模板链相结合的两种引物；④A、T、G、C四种脱氧核苷酸；⑤耐热的DNA聚合酶，一般用TaqDNA聚合酶；⑥能严格控制温度变化的温控设备 过程 变性：当温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解 ↓　旋为单链 复性：温度下降为50 ℃左右时，两种引物通过碱 ↓　基互补配对与两条单链DNA结合 延伸：当温度上升到72 ℃左右，四种脱氧核苷酸 在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配 对原则合成新的DNA链 1．如何正确区分破碎动物细胞和植物细胞的原理和方法？ 原理 方法 动物细胞 (鸡血细胞) 在低浓度溶液中会吸水甚至涨破 鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液 植物细胞 (洋葱细胞) 洗涤剂能够瓦解细胞膜 在切碎的洋葱中，加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 2.如何区分DNA粗提取实验中部分操作的目的？ 加蒸 馏水 ①加到鸡血细胞液，使血细胞吸水涨破 ②加到含DNA的2 mol/L NaCl溶液，使DNA析出 用纱布 过滤 ①过滤血细胞破裂液，提取细胞核物质(滤液) ②滤取0.14 mol/L NaCl溶液中析出的DNA(黏稠物) ③过滤溶有DNA的2 mol/L NaCl溶液(滤液) 用NaCl 溶液 ①加2 mol/L NaCl溶液，溶解提取的细胞核物质 ②(加蒸馏水)0.14 mol/L NaCl溶液使DNA析出 ③加2 mol/L NaCl溶液，溶解滤取的DNA黏稠物 ④用2 mol/L NaCl溶液，溶解丝状物用于鉴定DNA 　 3.什么是3′端和5′端？DNA复制为什么需要引物？ 为了明确地表示DNA的方向，通常将DNA的羟基(—OH)末端称为3′端，而含磷酸基团的末端称为5′端；一个双链DNA分子中含2个3′端和2个5′端，如果一条链的方向是3′→5′，则另一条链的方向就是5′→3′，这就是反向平行的含意。 DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链。PCR实验中，引物长度通常为20～30个核苷酸。 4．PCR实验中应注意哪些问题？如何进行PCR结果的分析与评价？ (1)PCR实验中的注意事项： ①避免外源DNA污染：所用仪器、缓冲液、蒸馏水等使用前进行高压灭菌。 ②缓冲液和酶分装成小份，－20 ℃低温保存。 ③每添加一种反应成分，更换一个移液器的枪头。 ④混匀后离心处理，使反应液集中在离心管底部。 (2)PCR结果的分析与评价： ①对于教材中的方法，可以通过计算DNA含量来评价扩增的效果。 原理：DNA在260 nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰，峰值的大小与DNA的含量有关。 过程：稀释→对照调零→测定→计算。 ②对于电泳检测的方法，可以通过在紫外线下直接观察DNA带的分布及粗细程度来评价扩增的效果。 ③扩增不成功的可能原因有：漏加了PCR的反应成分，各反应成分的用量不当，PCR程序设置不当等。 知识点：多聚酶链式反应(PCR)扩增DNA片段 【例】(2010·盐城五校联考)多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般要经历30多次下述循环：95 ℃条件下使模板DNA变性、解链→55 ℃条件下复性(引物与DNA模板链结合)→72 ℃条件下引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。下列有关PCR过程的叙述，不正确的是(　　) A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现 B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的 C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、4种核糖核苷酸 D．PCR与细胞内DNA复制相比，其所需要酶的最适温度较高 【思路点拨】PCR一般要经历30多次循环，每次循环可以分为变性、复性和延伸三步。从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸。DNA变性(90 ℃左右)：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。复性(50 ℃左右)：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。延伸(72 ℃左右)：在Taq酶(在72 ℃左右活性最高)的作用下，以四种脱氧核苷酸为原料，从引物的5′端向3′端延伸，合成与模板链互补的DNA链。