牛奶中醛脱氢酶的动力学研究.doc

【标题】牛奶中醛脱氢酶的动力学研究 【作者】马永红 【关键词】牛奶??醛脱氢酶??动力学 【指导老师】何士敏 【专业】生物科学 【正文】1.前言牛奶营养丰富、容易消化吸收、物美价廉、食用方便，是最“接近完美的食品”，人称“白色血液”，是最理想的天然食品[ 1]。奶中的蛋白质主要是酪蛋白、白蛋白、球蛋白、乳蛋白等，所含的20多种氨基酸中有人体必须的8种氨基酸，奶蛋白质是全价的蛋白质，它的消化率高达98%[ 2?]。乳脂肪是高质量的脂肪，品质最好，它的消化率在95%以上，而且含有大量的脂溶性维生素。奶中的乳糖是半乳糖和乳糖，是最容易消化吸收的糖类.奶中的矿物质和微量元素都是溶解状态，而且各种矿物质的含量比例，特别是钙、磷的比例比较合适，很容易消化吸收[3?]。牛奶和奶制品干酪中含有一种CLA的物质，能有效破坏人体内有致癌危险的自由基，并能迅速和细胞膜结合，使细胞处于防御制癌物质侵入的状态，从而起到防癌作用。而且牛奶中所含的钙能在人体肠道内有效破坏致癌物质，使其分解改变成非致癌物质，并排出体外[ 4?]。牛奶中所含的维生素A、维生素B2、维生素D等对胃癌和结肠癌都有一定的预防作用[12?]?.。而且牛奶中还含有多种能增强人体抗病能力的免疫球蛋白抗体，也有防癌作用[ 5?]。血清中醇脱氢酶活力是急性肝实质细胞损伤有诊断价值的指标。正常人或无继发性肝病患者的血清酶活力为阴性[ 9]。牛奶被乙醛脱氢酶氧化后，它的理化性质发生了变化，它的变化是否对人类有害，这对人类来说具有很重要的意义。目前国内对牛奶中醛脱氢酶的动力系统的研究极少，并没有相关的研究，而牛奶是人们目前生活中的必不可少的饮品，它对人类的健康息息相关，乙醛脱氢酶（ALDH）的主要作用是将有毒的乙醛氧化为无毒的乙酸，牛奶经过醛脱氢酶的氧化，它的一些理化性质会发生变化[ 10?]。关于牛奶中醛脱氢酶的研究目前国内外很少有报道。本次研究，旨在揭示牛奶中醛脱氢酶的生理功能以及影响因素，从而为牛奶的研究提供科学的依据。2.?材料及方法2.1?材料：??鲜牛奶（来源于涪陵区马鞍私人养殖奶牛）2.2?方法2.2.1最适温度，pH值和底物浓度的确定???用取一支试管，先在试管中加入2ml鲜牛奶，再加入2滴亚甲基蓝（浓度0.01%）,再加入乙醛1ml作为底物，再加入所需PH的磷酸缓冲液1ml，震荡，混匀，最后加入0.5毫升液体石蜡，在所需温度的恒温水浴锅中水浴5min，取出试管加入2ml的三氯乙酸（浓度为5%）沉淀牛奶中的蛋白质，再过滤，过滤后取滤液在最适波长下测定其OD值。（注：由于醛脱氢酶脱下的氢使亚甲基蓝退色，所以OD值小则证明脱氢酶的活性强，采用723N型可见光分光光度计。下同。）2.2.2?测定波长的选择?用取一支试管，先在试管中加入2ml鲜牛奶，再加入2滴亚甲基蓝（浓度0.01%）,再加入乙醛1ml作为底物（最适浓度），再加入最适PH的磷酸缓冲液1ml，震荡，混匀，最后加入0.5毫升液体石蜡，以最佳的温度在恒温水浴锅中水浴5min，取出试管加入2ml的三氯乙酸（浓度为5%）沉淀牛奶中的蛋白质，再过滤，过滤后取滤液在波长为370nm—590nm之间,波长间隔20nm分别测定其OD值。2.2.3醛脱氢酶最适温度的测定???用取5支试管，先分别在试管中加入2ml鲜牛奶，再分别加入2滴亚甲基蓝（浓度0.01%）,再分别加入乙醛1ml作为底物（最适浓度），再加入最适PH的磷酸缓冲液1ml，震荡，混匀，最后加入0.5毫升液体石蜡，以所需的温度在恒温水浴锅中水浴，每支试管间隔2min取出，用滴管把液体石蜡吸净，加入2ml的三氯乙酸（浓度为5%）沉淀牛奶中的蛋白质，再过滤，过滤后取滤液在最适波长下测定其OD值。按照上述步骤分别在温度为25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃的恒温水浴内反应，每个温度做五个管。2.2.4?醛脱氢酶最适pH的测定???取5支试管，先在试管中加入2ml鲜牛奶，再加入2滴亚甲基蓝（浓度0.01%）,再加入乙醛1ml作为底物（最适浓度），再加入所需PH的磷酸缓冲液1ml，震荡，混匀，最后加入0.5毫升液体石蜡，以最佳的温度在恒温水浴锅中水浴，每个两分钟取出一管，取出试管后用滴管将液体石蜡吸净再加入2ml的三氯乙酸（浓度为5%）沉淀牛奶中的蛋白质，再过滤，过滤后取滤液在最适波长下测定其OD值。先配制pH值分别为6.0，6.5，7.0，7.5，8.0的磷酸二氢钠—磷酸氢二钠缓冲液，按照上述步骤将每个pH值分别做五个管，也是间隔2min取出一管，经过处理后测定其OD值。2.2.5醛脱氢酶最适底物浓度的测定???用取一支试管，先在试管中加入2ml鲜牛奶，再加入2滴亚甲基蓝（浓度0.01%）,再加入乙醛1