几种市售洗涤剂对蚕豆根尖细胞诱变的研究.doc

【标题】几种市售洗涤剂对蚕豆根尖细胞诱变的研究 【作者】李希龙 【关键词】蚕豆微核??微核率??洗涤剂 【指导老师】何秀丽 【专业】生物科学 【正文】1?引言蚕豆属豆科（leguminosae）一年生草本；茎直立，无毛，高30—180厘米。羽状复叶有小叶1—3对，顶端卷须不发达而为针状；托叶大，半箭头状。花一至数朵，腋生在极短的总花梗上；花白色带红，有紫色的斑块；萼钟形，萼齿5，披针形。荚果大而肥厚；种子卵圆形，略扁。花果期4—5月，且是良好的蜜源植物。原产里海南部至非洲北部，公元一世纪时始由欧洲传入我国，现我国各地都有种植。蚕豆含有很高的蛋白质和糖，它的嫩荚果是春末夏初的可口蔬菜，干豆粒可以加工成多种食品。蚕豆鲜草含大量的氮磷钾等成分，是其他作物生长的良好绿肥。秸杆和荚叶粉碎后可作畜禽饲料，鲜豆苗在开花期可做青饲料。种子、种壳、花、果荚、及叶均可入药，有止血、利尿、解毒、消肿的功用。洗涤剂是一种价格低廉、产量高、需求量大、去污力强及多种用途成为人们生活中消费量极大的日用化学品。其基本成分是表面活性剂和一些助洗剂，有强洗涤作用，可以有效去除碗筷、瓜果上的油渍和农药。目前，日用化学工业的发展和人民生活水平的提高,?使各类洗涤剂相继问世,?其种类和产量与日俱增,?在人们的生活中占有越来越重要的位置，随之而来的环境污染也日益严重，其中生活污水中以洗涤剂对水的污染较为普遍。虽然洗涤剂属于低毒或微毒类化合物，但长期积累也会产生一定的毒副作用[9]，其中所含的表面活性剂?(lAS)及苯和磷等助剂对生态环境的污染和人类健康的潜在危害已引起了全世界的关注。本实验就是通过对涪陵的几种市售洗涤剂对蚕豆根尖细胞的诱变比较研究，可以让人们了解洗涤剂对环境的污染以及慢性危害。对提高人们的物质文化生活水平具有一定的意义。[1]微核（micronucleus，简称MCN），是真核生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。[2]即微核是细胞的染色体发生断裂后，细胞进入下一次分裂时，染色体片段不能随有丝分裂进入子细胞，而在细胞浆中形成直径小于主核的，嗜色与主核一致。完全与主核分开的圆形或椭圆形微小核。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体片断产生的。在细胞有丝分裂时，受到有害理化因子的损伤，染色体发生断裂形成断片。若在正常情况下，这些断片会自然愈合，但在污染的影响下，这些愈合就会受到阻碍，甚至还会有所增强。这些断片由于缺乏着丝点，不能移向两极而停留在细胞质中，形成大小不等的小核。即微核。[3]微核是环境中致畸变物对生物细胞的损伤，反之，也可以利用微核作为一种评价遗传毒性的指标。[4]2?方法与步骤2.1?供试材料蚕豆种子（购于涪陵农贸市场）2500g左右。2.2?仪器设备及用具生化培养箱、电子显微镜、天平（马头牌JY?-Z架盘药物天平）、瓷盘、纱布、烧杯（50 ml、500 ml）、容量瓶（100ml）、移液管(1ml、2ml、5ml)、培养皿、载玻片、盖玻片、滤纸、废液桶、显微照相系统、玻璃棒、试管、滴管、标签、镊子。2.3?药品与试剂田七草本抑制菌洗洁精（广西奥奇丽股份有限公司）、立白洗洁精（广州立白企业集团有限公司）、将美雅餐具洗涤剂（丹东市美雅化妆品厂生产）、酒精、蒸馏水、盐酸、冰醋酸、醋酸、凡士林2.4?药品的配制2.4.1?洗涤剂的配制将该三种洗涤剂分别配制成浓度为2ml/l、4ml/l、8ml/l和16ml/l的溶液。[2]即取0.2ml的洗涤剂于100ml的容量瓶中定容到100ml，即为2ml/l；同理即可配制出浓度为4ml/l、8ml/l?和16ml/l。再取100ml的蒸馏水做对照。2.4.2?固定液的配制固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。单纯的固定液一般难以达到这些要求，因此在实验中使用两种混和的固定液。卡诺氏固定液是效果良好的固定液。Carnoy固定液（95％酒精：冰醋酸=3：l）每次使用前均为临时配制，固定时间15分钟至24小时，冰箱、室温均可。实验中可根据需要适当改变甲醇和冰醋酸的比例，冰醋酸比例增加，利于细胞膨胀、染色体铺展，但易导致细胞破裂、染色体散失[5]。2.4.3?醋酸洋红染液的配制冰醋酸45ml＋55ml蒸馏水＋0.5克洋红?=100ml醋酸洋红染液先将洋红溶于蒸馏水中，再加入冰醋酸充分摇匀后，加热煮沸 10分钟，待冷却后，即可使用。[6]2.4.4?解离液解离液是能够快速的将蚕豆根尖细胞杀死，并且使细胞与细胞之间变得松散，所以解离液的浓度和解离的方法可直接影响后一步的染色和压片的效果，在实验中解离液浓度主要有１mol/l和0.1mol/l的HCl