医学论文：hplc测定橘叶中橙皮苷的含量.docVIP

【摘要】? 目的：建立高效液相色谱法测定橘叶中橙皮苷含量的方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为kromasil c18（4.6 mm×250 mm,5　μm）,流动相为甲醇—醋酸（36%）—水（382∶60），检测波长为283　nm。结果：橙皮苷检测浓度在（0.05～0.5） mg/ml范围内线性关系良好（r=0.999 5），平均加样回收率为96.6%，rsd=1.9%（n=5）。结论：本方法简便、灵敏、准确，可用于橘叶的质量控制。 【关键词】? 高效液相色谱法 橘叶 橙皮苷 含量测定 ??? 1?? 实验材料 ??? 高效液相色谱仪为ssi-series ?pump泵ssi model 500-detector单元液相色谱仪；pc-3000系统检测仪；tl-9000色谱工作站；超声处理器（lc-350a）；甲醇为国产色谱纯溶剂，天津市永大化学试剂开发中心出产；乙酸为国产分析纯试剂；水为实验室专用纯水机xyd-10-h处理超纯水；橙皮苷对照品由中国生物制品检验所提供，批号：110721-200512；橘叶8批，由中药材市场购买，均由山西省药品检验所中药室主任和建国鉴定。 ??? 2?? 方法与结果 ??? 2.1?? 色谱条件 ??? 色谱柱为4.6 mm×250 mm，十八烷基键合硅胶为填充剂，柱温为常温，检测波长为283 nm，以甲醇—醋酸（36%）—水（382∶60）为流动相，流速0.8 μl/min。对照品及样品的液相色谱图见图1。 ??? a. 对照品???? b. 样品???? 1. 橙皮苷 ??? 图1?? 对照品及样品的hplc图 ??? 2.2?? 对照品溶液制备 ??? 精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml含0.4 mg橙皮苷的溶液，摇匀，作为对照品溶液备用。 ??? 2.3?? 供试品溶液制备 ??? 将收集的橘叶研成粗粉，精密称定1 g，置索氏提取器中，加石油醚（60～90）80 ml，加热回流3 h，弃去石油醚，药渣挥干，加甲醇80 ml，再加热回流至提取液无色，放冷，滤过，滤液置100 ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇定容至刻度。 ??? 2.4?? 线性关系考察 ??? 精密称取橙皮苷对照品0.000 54 g、0.001 03 g、0.002 04 g、0.004 16 g、0.005 09 g分别置10 ml容量瓶中加甲醇制成每1 ml含0.05 mg、0.1 mg、0.2 mg、0.4 mg、0.5 mg橙皮苷的溶液，各取10 μl注入色谱仪中,按色谱条件测得峰面积积分值，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为y=204 621 152 700x+2 155 993.329，r=0.9 995，橙皮苷在（0.05～0.5） mg/ml呈良好的线性关系。??? 2.5?? 精密度试验 ??? 精密吸取2.2中的对照品溶液（0.4 mg/ml）10 μl连续进样6次，测橙皮苷峰面积，结果分别为88 652 906、86 590 036、85 480 256、87 424 068、87 424 661、87 679 805，rsd为0.9%。表明仪器进样精密度良好。 ??? 2.6?? 稳定性实验 ??? 取2.3供试样品溶液分别在0 h、2 h、4 h、8 h、20 h进样10 μl，测得橙皮苷的峰面积分别为25 926 741、26 104 361、26 181 248、26 653 055、25 888 751，rsd为2.3%。表明供试品溶液在室温下20　h内基本稳定。 ??? 2.7?? 重现性实验 ??? 取亳州市场购买的江苏产地的橘叶，按2.3供试品溶液制备方法制备6份，分别进样10　μl，测定rsd为1.7%。表明测定方法重现性良好。 ??? 2.8?? 加样回归试验 ??? 取已知含量的药材5份，分别加入同样含量的橙皮苷对照品，按供试品溶液制备方法和测定条件测定。结果见表1。 ??? 2.9?? 样品测定 ??? 取不同产地橘叶药材，按2.3方法制备供试品溶液，测定橙皮苷含量，结果见表2。 ??? 3?? 含量测定限度 ??? 根据表2橙皮苷含量测定结果，将橘叶药材的橙皮苷含量限度定为本品按干燥品计算，含橙皮苷（c28h34o15）不得少于1.25%。 ??? 4?? 讨?? 论 ??? 用hplc测定橘叶中橙皮苷的含量，结果准确，精密度、重现性良好，平均回收率96.6%，rsd为1.9%。在提取方法上，比较了超声处理与加热回流提取的效果，结果表明加热回流提取比较完全，因此应用加热回流法。橙皮苷可以作为橘叶质量控制的指标。【参考文献】? ［1］江苏新医学院. 中药大辞典（下册）［m］.上海：上海科学技术出版社，1