医学论文：浅谈细菌鉴定仪出现“不能鉴定细菌”的处理.docVIP

浅谈　　我们对现今应用较为普遍的vitek-ams鉴定系统中报告“不能鉴定细菌”(uio)菌株作了进一步分析，探讨其发生原因、处理方法，以期建立一套切实可行的 仪器与手工方法相结合的 细菌鉴定方法。 　　一、材料与方法 　　1.仪器与试剂：vitek-ams 60型全自动细菌鉴定仪及其配套gni、gpi、ybc试验卡（生物梅里埃公司产品)。 　　2.试验菌株：1 025株本院1999.10.21-2000.3.3临床标本分离的菌株进行了vitek- ams鉴定，其中应用gni 卡631例、gpi卡334例、ybc卡60例。 　　3.vitek-ams鉴定法：根据细菌表型特征，选择相应gni+、gpi、ybc卡，严格按仪器操作说明进行，孵育后当仪器报告结果为uio时，挑取生长对照孔(gpi卡第1孔、gni+卡第3孔、ybc卡第24孔)悬液于非选择性培养基上重新分离，观察是否纯培养，若是，分别按同法及以下两法鉴定。否则， 经纯培养后重新上机鉴定。 　　4.双歧检索鉴定法：根据vitek全自动微生物分析系统技术资料提供的双歧检索表，依生化结果检索至属或种。 　　5.常规鉴定法：按照全国临床检验操作规程［1］进行，并经api系统(生物梅里埃公 司) 复核鉴定至种。部分菌株鉴定依据文献［2］进行。 　　二、 结果 　　1.uio 发生机率：总共1025株细菌鉴定中，共出现 uio 44株，占4.3%。其中gpi卡334株，出现uio16株，占4.8%；gni+卡631株，出现uio 24株，占3.8%；ybc卡60株，出现uio4株，占6.7%。 　　2.uio发生原因：在44株出现uio中，9株（0.9%)为待检细菌不纯，3株(0.3%)为浊度不合要求，2 株(0.2%)为接种物孵育时间过长（超过48 h）， 2株(0.2%)为超出试验卡鉴定范围（均为臭鼻克雷伯菌），1株(0.1%)为菌悬液不乳化（粘液型绿脓假单胞），其他如冲液时气泡过多，或其他原因不确定者27株（2.6%）。 　　3.处理：（1）9株不纯菌株，经纯培养后，重新上机，均能成功鉴定。（2）35株纯培养但报告uio菌株中，18株(1.8%)可通过双歧检索法获得结果，并与常规分类法结果完 全一致。3 株（0.3%）浊度不合要求者经调整浊度后重新上机获得结果。 2株(0.2%)接种物超过48 h菌株，经重新孵育后得以鉴定。1株(0.1%)为悬液不乳化菌株经配制3个麦氏单位菌悬液，然后低速离心1～2 min(1 000 r/min)，取上清液比浊并调节到所需的浓度后，得以鉴定。(3)余下11株(1.1%)菌中，仅2株(1株为大肠埃希菌，另1株为臭鼻克雷伯菌)不能从双歧检索表中查出 结果，其他9株(主要为洋葱假单胞菌、琼氏不动杆菌、木糖产碱氧化杆菌等)，虽能从双歧检索表获得结果，但与常规鉴定法结果不相符合，或出现矛盾的生化结果，需增加试验项目，按常规鉴定方法及 api系统报告结果。 　　三、讨论 　　实验表明95.7%的临床分离菌株可通过vitek-ams正确鉴定，仅4.3%菌株无法一次性成功鉴定。细菌不纯是产生这部分菌株的主要原因（占近1/5），其他如待检菌菌龄、菌液浓度也是关系鉴定成败的关键。由于仪器本身原因（如对于罕见生物型、新种或不典型菌株无法鉴定）也不可忽视。正确处理这部分菌株，有重要的临床意义。实际应用自动化仪器时，必须挑取纯培养菌落，可提高鉴定率，对确认为纯培养而无法鉴定者，可通过传统分类法，参照双歧检索表能成功鉴定将近一半菌株，因此合理应用双歧检索表不失为一种较好的辅助方法。但仍有占总数1.1%菌株需用常规方法或其他方法如api系统重新鉴定。 ? 　　参考文献 　　1，叶应 妩，王毓三，主编. 全国临床检验操作规程. 第2版. 南京： 东南大学出版社,1997.5. 　　2，patrick r. manual of clinical microbiology (7th edition). washington dc: american society for microbiology, 1999.316-647. ? ? 1