胚胎干细胞培养方法研究进展.pdfVIP

Medical Journal ·116· 广东医学2010年1月第3l卷第1期Guangdoug Jan．2010，V01．31，No．1 ?综述·。讲座i 胚胎干细胞培养方法研究进展宰 吴静，胡东，张荣渡△ 安徼理工大学医学院(安徽淮南232001) 胚胎干细胞(ESC)是一种永生化细胞，在适宜培养条件病毒及其他已知或未知的病原体，若将这些ESC用于临床 下具有永久的自我更新能力并维持未分化状态、高端粒酶活 治疗，可能给患者带来巨大危险口J。 性、正常核型、胚胎表面标志及多潜能转录因子的表达，如 人源性细胞可作为hEsc的饲养层细胞，如人胚胎成纤 SSEA、OCT-4、Nanog等。ESC被认为可以提供一种理想的维细胞及人皮肤成纤维细胞等。通过广泛筛选，可在一定程 生物学平台，用于多方面的科学研究与临床应用。如药物筛 度上避免病原体的污染。从而保证供者的饲养层细胞的安全 选平台的建立、细胞发育与分化的分子调节机制研究、基因 性。由于胎盘的高效屏障作用，人胎盘成纤维细胞制备的饲 靶向敲除动物模型的构建、组织工程种子细胞及基因治疗载 养层可大大减少病原体污染可能性。更为理想的方案是用 体的建立、细胞治疗及再生医学等。选择最优化的细胞培养 人ESC分化出成纤维样细胞并体外扩增，将这些成纤维样 基对于ESC的研究及临床应用是至关重要的。一个合格的 细胞作为EsC的饲养层，这样既保证了饲养层与Esc间的 ESC培养基的首要条件为促进Esc的永久性分裂增殖及维 同源性，又避免了外源性病原体的引入。这种培养体系下的 持Esc的未分化状态，前者是对ESC数量上的要求，后者是 hESC能长期维持ESC的生长特征，保持向三胚层分化的潜 对功能的保证。为满足这2个条件，已建立有很多的标准方 能、无限未分化增殖能力及正常的核型。这个方案存在的问 法，一般要求ESC生长在有丝分裂失活的饲养层细胞 题是原代hESC的培养仍然需要非同源性饲养层的支持。 (FEEDER)上，基本培养基多为DMEM并添加胎牛血清 除了应用最为广泛的成纤维细胞，饲养层细胞还可以为子宫 (FCS)及白血病抑制因子(LIF)等。另外，为了排除不明外 上皮细胞(UE)、大鼠肝细胞(BRL)、人包皮成纤维细胞、脾 源血清成分及病原体等干扰，在满足促进ESC分裂增殖及 维持其全能性的基础之上，又尝试及建立了其他培养基，包 等H1采用生长停止的彩红鳟鱼脾细胞(RTS34st)为饲养层． 括条件培养基(CM)、无饲养层、无血清、血清替代物(SR)非 能维持zESC的未分化状态，碱性磷酸酶及SSEA—l阳性。 务件培养基等。 然而，FEEDER细胞的介入除了会导致异源物质、病原 l饲养层细胞 体等缺点，还会对ESc生长、增殖度分化等研究造成限制． 因为在饲养层培养体系中，很多数据都来源于饲养层细胞与 FEEDER对ESC自我更新及全能性的维持起重要作用。 其机制仍未完全阐明，很大程度上与饲养层所提供的细胞接 触及复杂的蛋白分子环境有关。小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)不仅可用来作为小鼠ESC的饲养层细胞，也可支持 人ESC的增殖。1981年EVANS等…采用丝裂霉素c灭活 其在塑料培养瓶表面未分化生长，保持其多潜能性及正常核 的STO成纤维细胞作为饲养层，在添加有10％Fc