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实验十六 RNA的定量测定.ppt
实验十六 RNA的定量测定 一、实验目的 掌握用地衣酚法测定RNA含量的原理和方法。 二、原理 当RNA与地衣酚试剂在沸水中加热时，RNA被酸降解，所产生的核糖进一步转变为糠醛，它与地衣酚(3，5-二羟基甲苯)在高铁离子的催化下可反应生成绿色物，后者在670nm处有最大吸收峰，在10～100mg/mL范围内其光密度值与RNA浓度有线形关系。 三、试剂和器材 1. 试剂 0.1mg/mL标准RNA溶液、地衣酚试剂、 2. 器材 可见分光光度计、恒温水浴锅 四、操作步骤 1. 标准曲线的绘制 取12只试管分成6组，按下表操作。取2管的平均值，以DNA浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。 2. 样品的测定 取待测样品1mL，加蒸馏水1mL及二苯胺溶液2mL，沸水浴保温45min，冷却，然后在670nm波长出测定光密度值。根据测得的光密度值，从标准曲线上查得相应的RNA的mg数，按下式计算待测样品的RNA的含量。 RNA%＝ 五、注意事项 样品蛋白质含量高时，应先用5％TCA沉淀蛋白质；有较多DNA样品时也会发生干扰，可在试剂中加适量的CuCl2. H2O， 可减少DNA的干扰。 六、思考题 * * 2 0 2.0 5 光密度值 混合均匀后，置沸水浴中加热45min，冷却，在670nm波长处比色 2 2 2 2 2 地衣酚试剂/mL 0.4 0.8 1.2 1.6 2 蒸馏水/mL 1.6 1.2 0.8 0.4 0 标准RNA/mL 4 3 2 1 0 试管 待测样品中测得的RNA的mg数 待测样品液中样品的mg数 X 100
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