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选修一 生物技术实践 核心考点整合 考点整合一：微生物的培养及应用 培养基种类及用途 划分标准 培养基种类 特点 途径 物理性质 液体培养基 不加凝固剂 工业生产 半固体培养基 加凝固剂，如琼脂 观察微生物的运动、分类鉴定 固体培养基 微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种 化学成分 天然培养基 含化学成分不明确的天然物质 工业生产 合成培养基 培养基成分明确（用化学成分已知的化学物质配成） 分类、鉴定 用途 选择培养基 培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长 培养、分离出特定微生物（如培养酵母菌和霉菌时，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌时，可在培养基中加入高浓度的食盐） 鉴别培养基 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品 鉴别不同种类的微生物，如可用伊红—美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌（若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽） 2．无菌技术（消毒和灭菌的区别） 项目 消毒 灭菌 条件 使用较为温和的理化方法 使用强烈的理化因素 结果 杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子） 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 适用 实验操作的空间、操作者的衣服和手 微生物的培养器皿、接种用具和培养基等 常用方法 煮沸消毒法（如在100℃，煮沸5～6 min）、巴氏消毒法（如在80℃，煮15min）；使用酒精、氯气、石炭酸等化学药剂进行消毒 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 3.统计菌落数目的方法（1）稀释涂布平板法（也叫活菌计数法）①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少个活菌。②操作：A．设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布棒将菌液涂布整个平板表面，放在适宜的温度下培养，计算菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平均数。 B．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300个的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。③计算公式：每个样品中的菌＝ ，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。 说明：此种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。（2）显微镜直接计数法①原理：此法利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量，但不能区分细菌的死活。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积（1 mm2）和高（0.1mm）的计数室，在1mm2的面积里又被划分成25个（或16个）中格，每个中格进一步划分成16个（或者25个）小格，但计数室都是由400个小格组成。②操作：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再将稀释的样品滴在计数板上，然后在显微镜下统计4～5个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按下面公式求出每毫升样品中所含的细菌数。③计算公式：每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数。（3）滤膜法：以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例，将已知体积的水过滤后，将滤膜放于伊红—美蓝培养基上培养，在该培养基上，大肠杆菌菌落呈现深紫色，可根据培养基上深紫色的菌落数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。 微生物的纯化培养（两种接种方法） 平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后，就可以得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。 稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 考点整合二：生物技术在食品加工中的应用 1．果酒和果醋制作的比较 2.腐乳的制作（1）实验原理：多种微生物发酵，豆腐中的蛋白质、脂肪被分解为肽和氨基酸、甘油和脂肪酸等。（2）实验流程：让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制。（3）操作注意事项：①控制好材料的用量：盐的浓度不能过低或过高，卤汤中酒的含量应控制在12%左右；②防止杂菌的污染。 3．制作泡菜并检测亚硝酸盐含量（1）实验原理：①利用乳酸菌制作泡菜的过程中会引起亚硝酸盐含量的变化；②在酸性条件下