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Http:// Http:// 热烈欢迎各位参加湛江安度斯细菌内毒素检查技术培训班! 细菌内毒素检测技术的应用与进展 湛江安度斯生物有限公司 2009年3月 * Http:// Page * 细菌内毒素检测技术的应用与进展 1、热原 2、历史回顾鲎试剂与细菌内毒素检查 3、BET的发展趋势与特点 * Http:// Page * 1、热原 热原是指临床上能引起哺乳动物发热反应的物质 Webster最先把热原定义为“致热剂” 早期的热原研究 静脉疗法的研究与热原的研究密切相关 在18、19世纪有很多关于静脉疗法的报道，所有病人在注射后都伴随有发热反应，当时的医生都深信发热对人体有益 1912年，Hort和Penfold阐明注射发热的真正本质，将细菌分为热原和非热原两种： 革兰氏阴性细菌为热原细菌 革兰氏阳性细菌为非热原细菌 他们推断所有的注射发热都是由革兰氏阴性细菌产生一种可滤过的、热稳定的物质导致的 * Http:// Page * 热原的检测 1941年，美国USP、FDA和NIH（美国国家卫生研究所）邀请了14个制药厂商参与第一次的热原协作研究 1942年，美国药典第一次收载热原检查法 该方法是将一定量的供试品通过静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况来判定供试品中热原含量是否符合规定 细菌内毒素检查(BET) 通常称使用鲎试剂来检测细菌内毒素的方法为细菌内毒素检查法。 * Http:// Page * 2、历史回顾鲎试剂与细菌内毒素检查 国际 1956年，美国科学家Frederic Bang发表论文《鲎的一种细菌性疾病》，阐述了细菌内毒素使鲎血凝固的现象.随后，Bang和Levin发明了鲎试剂。 1980年，FDA发表使用鲎试剂检查人用和兽用注射药终成品内毒素的指引；美国药典20版（USPXX）第一次收载BET法 1989年英国药典收载BET法 1991年日本药局方收载BET法 1999年，USPXXIV版规定670种药品用BET法检查，保留热原检查的药品约20种 2000年，国际协调委员会使USP、EP和JP达成《BET的国际协调方案》，统一的BET法收载于USPXXIV版NF19的第二增补本中，并于2001年1月1日生效 * Http:// Page * 国内 1983年，由11个单位参加的卫生部鲎试剂研究协作组的成立 1988年，卫生部颁布《细菌内毒素检查法》和鲎试剂标准 1991年，卫生部部颁标准规定4种药品可使用细菌内毒素检查法 1993年，中国药典（CP）九零版第二增补本收载BET法 1995年版CP规定13个品种使用BET法 2000年，CP2000版细菌内毒素检查品种增至69种；附录《细菌内毒素检查法应用指导原则》中收录了BET定量法 2005年，CP2005版细菌内毒素检查品种增至168种;BET法正式收载光度测定法。 * Http:// Page * 3、BET发展趋势与特点 BET技术的发展趋势 细菌内毒素检查取代热原检查 自19世纪80年代FDA批准鲎试验的应用以来，BET法所具有的优点：快速、灵敏、可标准化等，表明它比热原检查法更适应现代制药工业的发展 各国药典规定的BET检查品种都经历了从无到有，从少到多的过程 BET取代热原检查已成为趋势 * Http:// Page * 走向统一的BET法 在初期各国颁布的BET法不尽相同，不利于药品的全球流通 WHO实现了内毒素的国际标准品（IS）的效价（IU）与各国内毒素标准品的效价（EU）的统一，即1IU=1EU 国际协调委员会综合USP、EP、JP的BET法，达成一个国际协调案——统一的BET法，于2001年实施 中国药典2005年版的BET法基本参照国际统一的BET法 * Http:// Page * BET技术的应用及发展的特点 BET方法呈多样化 凝胶法 比浊法 动态比浊法 终点比浊法 比色法 动态比色法 终点比色法 湛江安度斯在BET方法学及BET技术发展的贡献 发明专利1：同体系模型法 发明专利2：动态终点法 发明专利3：细菌内毒素快速检测盒 发明专利4：定量法专用内毒素套盒 发明专利5：微量终点显色法 * Http:// Page * BET技术趋向自动化 凝胶法 恒温设备方面，干式恒温仪器逐步取代水浴恒温箱 定量BET 试管式定量检测仪 酶标板式定量检测仪 全自动的BET系统 专用的数据软件 湛江安度斯公司 TAL-40型试管恒温仪（凝胶法） BET专用软件——生物探针2002 生物探针2002 * Http:// Page * BET试剂的发展 鲎试剂的灵敏度越来越高 凝胶法最高达0.0075EU/ml，商品试剂0.015EU/ml 定量法高达0.001EU/ml 鲎试剂抗干扰性能