药学第15章转录与基因表达调控.ppt

2008年5月 药学类专业生物化学讲稿 Zn2+可稳定α-螺旋，使α-螺旋能镶嵌于DNA的大沟中。DNA、RNA结合模序。 2008年5月 药学类专业生物化学讲稿 2008年5月 药学类专业生物化学讲稿 2008年5月 药学类专业生物化学讲稿 LZ结构与DNA结合。 2008年5月 药学类专业生物化学讲稿 一、逆转录的概念 以RNA为模板，以dNTP为原料，在逆转录酶作用下，合成DNA的过程称为逆转录（ Reverse Transcription ） 逆转录酶 第三节 反转录 2008年5月 药学类专业生物化学讲稿 逆转录酶(reverse transcriptase) RDDP 模板：RNA 原料：dNTP 引物：tRNA 产物：cDNA 二、逆转录的物质基础 2008年5月 药学类专业生物化学讲稿 三、逆转录病毒细胞内的逆转录过程 RNA 模板 逆转录酶（RDDP) DNA-RNA 杂化双链 逆转录酶(RNA酶，Rnase) 单链DNA 逆转录酶(DDDP) 双链DNA （cDNA) 2008年5月 药学类专业生物化学讲稿 逆转录酶 A AA A T T T T AAAA SI核酸酶 DNA聚合酶Ⅰ 碱水解 T T T T 分子生物学研究可应用逆转录酶，作为获取基因工程目的基因的重要方法之一，此法称为cDNA法。 以mRNA为模板，经逆转录合成的与mRNA碱基序列互补的DNA链。 试管内合成cDNA cDNA ?complementary DNA? 2008年5月 药学类专业生物化学讲稿 四、逆转录研究的意义 逆转录酶和逆转录现象，是分子生物学研究中的重大发现。 逆转录现象说明：至少在某些生物，RNA同样兼有遗传信息传代与表达功能。 对逆转录病毒的研究，拓宽了20世纪初已注意到的病毒致癌理论。 2008年5月 药学类专业生物化学讲稿 致癌病毒多数为RNA病毒，少数DNA病毒。 致癌病毒中存在的一些特殊碱基序列，称为癌基因或病毒癌基因。 存在于正常细胞的癌基因称为细胞癌基因或原癌基因。在正常情况下，这些基因处于静止或低表达状态，不仅对细胞无害，而且对细胞维持正常功能具有重要作用；当其受致癌因素作用被活化发生异常时，则可导致细胞癌变。 五、反转录与癌变 2008年5月 药学类专业生物化学讲稿 常见原癌基因及其表达产物： ①src家族：包括src、abl、fes、fgr、ros等10多种基因。它们的表达产物主要是酪氨酸蛋白激酶家族。 ②ras家族：Ha-ras、Ki-ras、N-ras等多种，其表达产物为信号传导蛋白质，如G蛋白。 ③myc家族：其表达产物多为DNA结合蛋白，常为一些转录调节因子。 ④sis家族：是生长因子编码序列。 ⑤erb家族：表达细胞骨架蛋白质，与细胞形态与运动有关。 2008年5月 药学类专业生物化学讲稿 癌基因与抑癌基因是调节细胞正常生长与增殖的两大类基因，这两类信号在细胞内产生的效应相互拮抗，维持平衡，对正常细胞的生长、增殖和衰亡进行精确地调控。 癌基因是正调节信号，促进细胞生长、增殖，并阻止其终未分化，调控失常时表现为肿瘤细胞的恶性增长。 抑癌基因是负调节信号，抑制细胞增殖，并促进分化，成熟和衰老，最后调亡。抑癌基因缺失时亦表现为肿瘤细胞的恶性增长。 癌变是癌基因与抑癌基因失衡的结果 2008年5月 药学类专业生物化学讲稿 pG-OH (ppG-OH, pppG-OH) U-OH GpU pGpA 第一次转酯反应 第二次转酯反应 UpA GpU 外显子1 内含子 外显子2 G-OH UpU pGpA 剪接过程的二次转酯反应 2008年5月 药学类专业生物化学讲稿 ? RNA编辑作用说明，基因的编码序列经过转录后加工，是可有多用途分化的，因此也称为分化加工(differential RNA processing)。 ④ mRNA的编辑(mRNA editing) 人类apo B基因 mRNA（14500个核苷酸） 肝脏 apo B100 （分子量为500 000） 肠道细胞 apo B48 （分子量为240 000） mRNA编辑 6666位C→U 结果CAA→UAA 2、tRNA的转录后加工 tRNA前体 RNA pol Ⅲ TGGCNNAGTGC GGTTCGANNCC DNA RNAaseP、内切酶 tRNA核苷酸转移酶、连接酶 ATP ADP 碱基修饰 （2）还原反应 如：U ? DHU （3）核苷内的转位反应 如：U ? ψ （4）脱氨反应 如：A ? I 如：A ? Am （1）甲基化 （1） （1） （3） （2）