小鼠血清中内源性代谢物的GCTOFMS分析.pdfVIP

V01．33 高等学校化学学报 No．6 OFCHINESE 2012年6月 CHEMlCALJOURNAL UNTVERSnlES 1188—1194 小鼠血清中内源性代谢物的GC／TOF·MS分析 吴胜明1，封 波2，程建华1，李海静1，方均建1，颜贤忠1，魏来2，董方霆1 (1．国家生物医学分析中心，北京l()0850；2．北京大学人民医院肝病研究所，北京lOOO“) 摘要采用气相色谱／飞行时问质谱(GC／1DF-Ms)联用仪建立了小鼠血清的代谢组学分析方法．通过对硅 烷化试剂的优化和去卷积分析，共检测到269个峰，其中相似度在800以上的代谢产物有46个：以核糖醇 为内标，任意选取18种内源性代谢产物考察此方法的精密度和稳定性，并通过14种标准氨基酸的混标溶液 进行定量分析考察本方法的线性关系．结果表明，14种氨基酸在2．78一113．20ng／“L浓度范围内线性关系 良好；18种内源性代谢产物的变异系数均在15％以内，具有较好的稳定性；并利用8种标准单糖，通过肟化 反应解决了糖在多个位置出峰的难点．该方法可用于代谢组学研究，并通过相关数据处理找出生物标志物， 为疾病诊断提供了新的思路． 关键词气相色谱／飞行时间质谱；肟化；硅烷化；代谢组学 A J0790．2012．06．013 中图分类号0657 文献标识码 DOI：lO．3969／j．issn．0251 代谢组学是研究生物体自身生理病理状态和生物体对外源性物质的生化效应的有力手段，不仅可 以研究代谢产物浓度的变化，还可研究分子的动态信息，从时间和空间上整体评价生物效应，是将时 3以及 概念后，该领域的研究迅速发展，成为全球关注的新热点之一，并在毒理学【2。]、疾病诊断旧“2 中医药现代化。1孔“3等领域得到了广泛应用．基于代谢组学的研究目的和对象，为表征尽可能多的代谢 物，有必要发展一种能够检测尽可能多的代谢产物的分析方法，并结合模式识别法等数据分析手段， 发现数据间的定性及定量关系，找到引起差异的目标代谢产物，阐明数据中蕴藏的生物学意义及其与 机体代谢的关系．目前，代谢组学的研究方法主要有核磁共振(NMR)、色谱及其与质谱(Ms)联用技 已广泛应用于代谢组学研究，其优势主要在于样品前处理简单，对样品无损性、无选择性．但与MS相 比，该方法灵敏度低且分辨率不高，有可能漏掉某些真正起作用而含量甚微的化合物信息；而Ms技 术具有高灵敏度、高分辨率和高专属性，随着质谱及联用技术的发展，其在代谢组学中的应用将倍受 关注㈨． 本文建立了以气相色谱／飞行时间质谱(Gc／TOF．MS)技术为基础的小鼠血清的代谢组学的研究方 法，为血清代谢组学的研究提供一种新的方法和思路． 1 实验部分 1．1仪器与试剂 公司)组成，配备MassLyllx工作站和NIST质谱数据库；DB．5气相色谱柱(柱长30m，直径o．25啪， Mini 壁厚0．25卜m，美国Agilent公司)；EppendorfPlus离心机和Eppendoff5810R离心机均购自 sPin 收稿日期：2叭1舶_29． 准号：2008zxlo002D16)和国家自然科学基金(批准号资助． 联系人简介：吴胜明，男，实验师，主要从事代谢组学研究．E—m础：ws-I哪k@163．cⅢ 董方霆，女，研究员，主要从事药物分析与代谢组学研究．E—mil：dft@p姒∞mic喜．cn 万方数据 No．6 吴胜明等：小鼠血清中内源性代谢物的Gc／TOF—Ms分析 浴恒温摇床购自常州诺基仪器有限公司；BF．2000M型氮气吹干仪购自北京八方世纪科技有限公司． 氯仿为国产分析纯(北京生化化学试剂厂)；甲醇和氯仿均为色谱纯，购自北京化学试剂公司； D一木