簇毛麦中一个E3泛素连接酶基因Hv-CMPG的克隆及功能鉴定.docVIP

  簇毛麦中一个 E3 泛素连接酶基因 Hv-CMPG 的克隆及功能鉴定# 费菲1，祝燕飞1，王慰1，王宗宽1，曹爱忠1，刘园1，邢莉萍1，王海燕1，谢旗2， 5 10 15 20 王秀娥1** （1. 南京农业大学细胞遗传所，作物遗传与种质创新国家重点实验室，南京 210095； 2. 中国科学院遗传与发育生物学研究所，北京，100101） 摘要：小麦近缘物种簇毛麦高抗小麦白粉病，携带广谱高抗白粉病基因 Pm21, 为了克隆簇 毛麦中的抗白粉病关键基因，阐明其白粉病抗性的分子机制，本实验室在前期利用大麦基因 芯片分析簇毛麦受白粉菌诱导表达谱，发现多个基因受白粉菌诱导后上调或下调表达。本研 究发现其中一个探针受白粉菌诱导后快速上调表达，半定量 RT-PCR 进一步证明该表达特 征。选择该基因根据其探针序列设计引物筛选簇毛麦受白粉病诱导的叶片 cDNA 文库，克 隆到其全长序列。序列分析结果表明，该基因全长 1677bp, ORF1362bp，编码 454 个氨基酸、 具有保守的 U-Box 结构域的蛋白质，定名为 Hv-CMPG。染色体定位分析表明，该基因定位 于簇毛麦 6V 染色体长臂上，其同源基因定位于大麦 6HL、小麦 6AL、6BL、6DL、短柄草 Bd3L 和水稻 R2 染色体的共线区域；体外泛素化试验结果证明，Hv-CMPG 具有 E3 泛素连 接酶活性，推测其通过泛素化介导的蛋白质降解途径在植物抗病信号传导中发挥作用；亚细 胞定位结果表明 Hv-CMPG 定位在细胞核和细胞质内；构建了 Hv-CMPG 基因的超量表达载 体，利用基因枪方法进行转基因功能互补试验，结果发现该基因的超量表达显著提高了转基 因受体品种扬麦 158 的白粉病抗性。表明 Hv-CMPG 在簇毛麦抗白粉病中发挥重要作用，其 作用的分子机制有待进一步研究。 关键词：簇毛麦；白粉病；Hv-CMPG；E3 泛素连接酶；转基因小麦 中图分类号：S512.S332.2 25 Cloning and functional analysis of a E3 ubiquitin ligase gene Hv-CMPG in Haynaldia villosa FEI Fei1, ZHU Yanfei1, WANG Wei1, WANG Zongkuan1, CAO Aizhong1, LIU Yuan1, XING Liping1, WANG Haiyan1, XIE Qi2, WANG Xiue1 30 35 40 (1. National Key Laboratory of Crop Genetics and Germplasm Enhancement, Cytogenetics Institute,Nanjing Agricultural University, NanJing 210095; 2. Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101) Abstract: Haynaldia villosa, a wheat related species, shows high and broad-spectrum resistance to wheat powdery mildew. The powdery mildew resistance gene Pm21 from H. villosa has been introduced into common wheat by the production of wheat-alien chromosome lines, and the T6VS/6AL translocation are now widely used in wheat breeding. For better understanding of the molecular mechanism of powdery mildew resistance mediated by Pm21, and cloning of the critical genes related to powdery mildew resistance, barley GeneChip was used for microarray analysis. Among the differentially expressed genes upon the infection of Blumeria graminis f.s.p. tritici (Bgt) in H. villosa, a rapidly up-regu