E2F1 抑制MDM2的表达依赖于p53.docVIP

  E2F1 抑制 MDM2 的表达依赖于 p53# 田绪1，陈优君2，胡汪来1，吴缅1** （1. 中国科学技术大学生命科学学院，合肥微尺度国家实验室，合肥 230027； 5 10 15 20 25 30 35 40 2. 北卡来罗纳大学教堂山分校细胞分子生理学系，美国北卡莱罗纳州，教堂山 27599） 摘要：MDM2 蛋白水平被过表达的 E2F1 所抑制，但是机制并不清楚。目的：研究 E2F1 抑制 MDM2 表达的分子机制。方法：Western 蛋白印染、半定量 RT-PCR、萤光素酶启动子活性分 析、染色质免疫沉淀等。结果：U2OS 细胞里 E2F1 能够抑制 MDM2 启动子活性进而抑制 MDM2 蛋白水平。E2F1 在 MDM2 启动子上有高度保守的结合序列，并且 E2F1 能够与部分高度保守 的序列结合，但是 E2F1 抑制 MDM2 启动子活性并不是通过这种启动子上的直接结合来介导的。 只有在 P53 存在的情况下 E2F1 才能抑制 MDM2 启动子活性。在 P53 野生型细胞 U2OS 中抑制 P53 的表达，能够降低 E2F1 对 MDM2 启动子的抑制能力。在 P53 缺失型细胞 H1299 中，只有 表达 P53 后 E2F1 才能够抑制 MDM2 启动子的活性。在 DNA 损伤刺激下 P53 和 E2F1 都被上调， 用 siRNA 抑制内源 E2F1 表达后发现，DNA 损伤刺激下上调的 E2F1 能够抑制 MDM2 启动子的 活性，进而促进 P53 的稳定。对 MDM2 的抑制能够促进 E2F1 诱导的细胞凋亡。结论：E2F1 通过抑制 P53 对 MDM2 的转录上调来抑制 MDM2 的表达水平，进而调控 MDM2-P53 负反馈通路。 关键词：E2F1；MDM2-p53 反馈通路；MDM2；p53 依赖的细胞凋亡 中图分类号：Q7 E2F1 inhibits MDM2 expression in a p53-dependent manner Tian Xu1, Chen Youjun2, Hu Wanglai1, Wu Mian1 (1. Hefei National Laboratory for Physical Sciences at Microscale and School of Life Sciences, University of Science and Technology of China, HeFei 230027; 2. Department of Cell and Molecular Physiology, University of North Carolina School of Medicine, Chapel Hill, NC 27599, USA) Abstract: MDM2 expression is down-regulated upon E2F1 over-expression, but the mechanism is not well defined. In the current study, we found that E2F1 inhibits MDM2 expression by suppressing its promoter activity. Although E2F1 binds to the MDM2 promoter, the inhibitory effect of E2F1 on the MDM2 promoter does not require the direct binding. We demonstrate that E2F1 inhibits MDM2 promoter activity in a p53-dependent manner. Knockdown of p53 in U2OS cells impairs the inhibitory effect of E2F1 on the MDM2 promoter. Consistent with this observation, E2F1 does not inhibit MDM2 promoter activity in p53-deficient H1299 cells, and the inhibition is restored when p53 is expressed exogenously. Both E2F1 and p53 are upregulated after DNA damage stimulation. We show that such stimulation induces E2F1 to inhibit MD