HGF对高糖诱导的大鼠系膜细胞内氧化应激的影响及其机制的研究.docVIP

  HGF 对高糖诱导的大鼠系膜细胞内氧化应 激的影响及其机制的研究# 李慧* 5 10 15 20 （复旦大学上海医学院病理学系，上海 200032） 摘要：目的 观察肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对高糖诱导的大鼠系膜 细胞(Mesangial cells,Msc)内氧化应激的影响并探讨其相关的机制。 方法培养的大鼠 MsC 分别在 5.6mmol/L D-糖的正常糖浓度（NG）和 30mmol/L 的 D-糖的高糖浓度（HG）条件下， 加入或不加入 HGF（20ng/ml）及 HGF 受体 c-met 的抑制剂 SU11274（5μM）作用 24h。应用 流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞内活性氧生成的情况；应用分光光度法检测细胞内谷胱甘 肽和丙二醛的含量。MsC 内抗氧化酶的 mRNA 表达及其活性情况分别采用 RT-PCR 和分光光度 法检测。细胞内 c-met, 谷氨酰半胱氨酸连 接酶 催化亚单位(catalytic subunit of glutamate-cysteine ligase，GCLC)和葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（Glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PDH）的 mRNA 及蛋白表达通过 RT-PCR 和 Western 印迹法检测。电泳迁移 率改变实验(EMSA)和同工酶电泳法分别应用于检测 USF 结合 GCLC 负调控区域的活性及 G6PDH 的活性。结果 HG 促使 MsC 表达 c-met 明显增加，HGF 能显著抑制高糖诱导的大鼠 MsC 内 ROS 的生成增多，丙二醛水平的上升和谷胱甘肽的水平下降。高糖对抗氧化酶的 mRNA 表 达没有显著影响但却严重削弱了它们（除外谷胱甘肽还原酶）的活性，HGF 则能抑制 HG 对 抗氧化酶活性的损伤。HGF 通过降低 USF 结合 GCLC 负调控区域的活性来增强 GCLC 的表达， 并能恢复 HG 引起的 G6PDH 表达及活性的下降。结论 HGF 能抑制高糖诱导的大鼠 MsC 内的氧 化应激，其机制可能是通过增强细胞内谷胱甘肽的合成实现的。 关键词：肝细胞生长因子；c-met；系膜细胞；谷氨酰半胱氨酸连接酶；葡萄糖－6－磷酸脱 氢酶 中图分类号：R363.2+1 25 The effect of HGF on high glucose-induced oxidative stress in rat mesangial cells LI Hui (Department of Pathology, Shanghai medical college, Fudan University, ShangHai 200032) 30 35 40 45 Abstract: Purpose To observe the effect of HGF on high glucose-induced oxidative stress in rat mesangial cells(MsC) and explore its relevant mechanism. Methods Rat MsC were cultured in normal glucose(i.e.5.6mmol/LD-glucose)or high glucose(i.e.30mmol/LD-glucose)conditions in the absence or presence of HGF(20ng/ml) and c-met inhibitor SU11274(5μM)for 24h. Flowcytometer and fluorescence microscope were used to detect reactive oxygen species in rat MsC. Intracellular malondialdehyde(MDA) and glutathione(GSH) level were examined by spectrophotometry. The mRNA expressions and activities of antioxidant enzymes including catalase,superoxidase dismuatse,glutathione peroxidase,glutathione reductase were evaluated by RT-PCR and spectrophotometry. Additionally, RT-PCR and Western blot were performed to identify the expression of