免疫检验自动化仪器分析.ppt

BNP防抗原过量的设计： 优化反应条件，令初始稀释度分析范围更宽，保证抗原抗体反应呈最佳比例 预反应程序：IgM，LamU，AlbU，β2MU VLinIntegral计算程序 抗体 抗体的质量 特异性强，效价高，亲和力强，R型 抗体的含量 抗体过量 抗体的特异性 抗体只针对相应的抗原，非特异性的交叉反应会引起伪浊度。 抗体的效价 一个合格的比浊用抗体其效价必须在1：20（抗体稀释度）以上，否则易形成伪浊度。 抗体的亲和力 亲和力强则抗体活性高，不仅可以加快抗原抗体反应速度，而且形成的免疫复合物较牢固，不易发生解离。 R型抗血清 以家兔为代表的小动物血清，如豚鼠、大白鼠、家兔、家禽、羊等动物的免疫血清。 这类抗血清亲和力高，与抗原结合后不易再解离，抗体过剩时易形成大而稳定的复合物，抗原过剩时则形成可溶性复合物。 H型抗血清 以马为代表的大动物血清，如驴、骡、马等动物的免疫血清。 该血清亲和力弱，抗原抗体结合后极易再解离，抗原过剩和抗体过剩皆易形成可溶性复合物。 pH：6.5~8.5 离子强度：在一定范围内，离子强度大，IC形成快；离子强度过低或无电解质存在，则不易出现可见的沉淀反应。 3. 增浊剂的使用　为了提高抗原抗体复合物的形成速度，常常要加入增浊剂，如分子量为6000～8000的3%～4% 聚乙二醇（PEG）或吐温-20（tween-20），以消除蛋白质分子周围的电子云和水化层，促进抗原抗体结合。但PEG浓度过高，分子量过大会引起血清中其他蛋白质（如IgM、α2巨球蛋白、脂蛋白）非特异性沉淀，形成伪浊度。因此，使用恰当的增浊剂，合适的浓度是准确测定所必须的。 4. 伪浊度　 非抗原抗体特异性结合形成的浊度，称为伪浊度，可导致抗原检测结果假性升高。伪浊度形成的原因包括①混浊标本、高血脂标本、反复冻融标本； ②抗体效价低（1:20）、抗血清灭活处理、抗血清含有交叉反应性抗体等； ③增浊剂PEG浓度过高； ④抗血清细菌污染和变质； ⑤器材尤其是比色杯不清洁、尘埃污染等； ⑥缓冲液的离子强度太高，pH和温度不适合等，都对浊度产生影响。 * * 第二十章　 免疫检验自动化仪器分析 1．了解免疫检测自动化的基本概念 2．了解免疫检测自动化设计的基本原理 3．了解免疫检测自动化仪器在临床上的应用 4．掌握常用的几种免疫检测自动化仪器的检测原理、应用以及评价， 本章重点 免疫检验自动化 (automation of immunoassays) 是将免疫学反应检测过程中的取样、加试剂、混合、温育、固相载体分离、信号检测、数据处理、打印报告和检测后的仪器清洗等步骤由计算机控制，自动化进行。 第一节 自动化免疫浊度分析系统 免疫浊度分析属液相沉淀试验，其基本原理是： 抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分子免疫复合物（19S），在增浊剂（如PEG、NaF等）的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（19S），使反应液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复合物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。 一、免疫透射比浊法 【原理】　一定波长的入射光线通过抗原抗体反应后的溶液时，被其中的免疫复合物微粒吸收、反射和折射而减弱(图9-7)，在一定范围内，吸光度与免疫复合物量呈正相关，而形成的免疫复合物量与参与反应的抗原和抗体的量呈函数关系。与已知浓度的抗原标准品比较，可确定标本中抗原含量。 二、免疫胶乳比浊法 原理　用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒（一般为0.2 μm），在遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝聚 ，使透射光和散射光即出现显著变化。如图所示：a为单个胶乳颗粒不阻碍光线透过，b为抗原抗体结合形成的凝聚胶乳大颗粒使透射光减弱或散射光增强。 三、免疫散射比浊法 【原理】　 粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成散射光。悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因素密切相关，其公式如下： 式中Iθ为与入射光成θ角处散射光强度；λ和I0为入射光的波长和强度；dn/dc为校正因子，反映了溶液折射指数和颗粒浓度的变化；M为颗粒分子量；c为浓度；N为阿佛加德指数；γ为颗粒到检测器的距离；θ为散射光与入射光的夹角（散射夹角）。 Iθ＝　I0［4π2（dn/dc) 2 Mc(1+cosθ)］ Nγ2λ4