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小鹅瘟疫苗简介 Kevin Bryant 一 小鹅瘟 简介 小鹅瘟（Gosling Plague，GP）是鹅细小病毒(Goose Parvoviruse,GPV)引起的雏鹅和雏番鸭的急性或亚急性的败血性传染病。 1956年我国学者方定一于扬州首次发现并分离到GPV。Derzsy病 小鹅瘟 简介 本病主要侵害出壳后4～20日龄的雏鹅和雏番鸭，具有传播快，发病率和致死率高的特点。 最典型的病变：小肠后段出现整条脱落的上皮渗出物混合凝固而形成长条状或香肠状的栓塞。 GPV感染目前无有效的治疗药物，防制本病主要依靠疫苗、高免血清和卵黄抗体。 小鹅瘟 简介 对外界因素有强大的抵抗力，能耐受脂溶剂和较高温度的处理。 其基因组为单股、线性DNA，大小约为5Kb 二 小鹅瘟疫苗分类 1，常规疫苗 2，基因疫苗 3，高免血清和卵黄抗体 常规疫苗 实际应用最多的一类疫苗。 主要分为以下几类： 1，减毒活疫苗： ①鹅胚化疫苗 ②鸭胚化疫苗 2，灭活苗 鹅胚化疫苗 方定一等于1961年扬州市流行的小鹅瘟分离的毒株，连续通过鹅胚绒毛膜传21代的弱毒株，在当时起到很好的控制作用。 缺点： 毒力返强 鸭胚化疫苗 猪瘟兔化弱毒疫苗 1980年陈伯伦等将小鹅瘟病毒采用鸭胚诱变，使病毒适应鸭胚。 优点： 1，对母鹅的安全性非常可靠。 2，可以避免来自鹅体的潜伏病原带入种蛋和 疫苗的危险。 3，种蛋来源方便，价格便宜。 缺点： 鹅鸭之间存在着可相互传递的疾病 灭活苗 优点： 不存在毒力返强现象，易于储存和运输 缺点： 1，死苗通常需要多次接种才能激发有效的免疫记忆 2，需用甲醛灭活，还需添加免疫佐剂，这些物质在应用时有一定的毒副作用 基因疫苗 Gene vaccine，也称为核酸疫苗或DNA疫苗，是一种携带外源抗原基因的真核重组表达质粒，将其直接注射机体，可在宿主细胞中表达外源基因，诱导特异性的体液免疫应答和细胞免疫应答，达到预防和控制疾病的目的。 Wolff等1990年最早报道。 基因疫苗 优点： 易于构建，生产成本低; 易于嵌入佐剂; 安全性好;免疫维持时间长; 对于新生动物，能够诱导比较强的免疫反应，不受母源抗体的影响; 不会产生抗DNA抗体，能够重复使用等优点 基因疫苗 缺点： 1，依赖宿主产生抗原 2，宿主细胞内外屏障 3，抗原表达量低 小鹅瘟VP3基因疫苗 首先构建了pcDNA-VP3真核表达载体。 为了增强其免疫原性，将鹅IL-2基因插到该载体上。 为了增加免疫刺激，还插入了一段CpG序列。 最后构建成了pcDNA-gIL2-VP3/CpG基因疫苗载体。 高免血清和卵黄抗体 GPV单抗（1989年朱少漩等最早应用） 优点： 1，治疗效果高于常规抗血清治疗效果。 2，避免了因同源血清中可能携带有其它病源微生物而造成的传染危害。 3，克服了常规抗血清的效价因免疫原不同或随不同生产批次而异的缺点 缺点： 抗体与病毒的中和机制常常是复杂多样，单抗的作用又太专一。 三 分离毒的Western-blot鉴定 图A 图B 图1-7 GPV分离毒Western-blot结果。 M,蛋白质分子量标记; 1,正常鹅胚尿囊液; 2,GPV-SZM; 3,TX 4,TZJ 5,JT 6,LD 7,GPV-JDG; 8,WJ 9,ZJ 10,GPV-YZM; 11,SYG61-42; 12,GPV-CZM; 13, SYG6120100225; 14, GPV-P.1; 15, YZL118Kd 34Kd 26Kd 19Kd 2 病毒尿囊液SDS结果 图A 图B 图1-5 GPV分离毒SDS结果。 M,蛋白质分子量标记; 1,正常鹅胚尿囊液; 2,GPV-SZM; 3,TX 4,TZJ 5,JT 6,LD 7,GPV-JDG; 8,WJ 9,ZJ 10,GPV-YZM; 11,AHTC-42; 12,GPV-CZM; 13, SYG6120100225; 14, GPV-P.1; 15, YZL37Kd 25Kd 20Kd 15Kd 100Kd 图A 图B 应用抗GPV单抗，对SYG6株第14代细胞毒感染的GEF进行间接免疫荧光实验的结果。 A： SYG61株第14代细胞毒感染GEF后的IFA结果: 在细胞核内出现特异性的绿色荧光 B：未感染病毒的正常GEF的IFA结果：无特异性荧光出现 3 间接免疫荧光的方法检测病毒的存在 4 细胞适应毒引